蝮蛇毒抗凝制剂简介

如前所述，我国在20世纪70年代后期开始研制蛇毒酶制剂，主要作为抗凝剂用于治疗血栓性疾病。我国研制的几种酶制剂有沉阳药学院和昆明动物研究所分别研制的“斜齿蛇抗血栓酶”和“去纤维母细胞酶”。 1981年几乎同时完成临床观察并通过技术鉴定。后来，沉阳药学院与中国人民解放军238医院合作，发现长白山地区的蕲蛇毒液是生产蕲蛇抗血栓酶（溶栓酶）的优质原料，生产出来的成品副作用小，疗效好。 1984年2010年召开鉴定会，定名为“响尾蛇抗血栓酶”，又称“血栓清除酶”。沉阳药学院和昆明动物研究所分别以白花蛇毒和白花蛇毒为原料开发了“白花蛇抗血栓酶”和“去纤酶”，中国医科大学毒液研究室以浙江白花蛇毒为原料。研制出“江浙白鹭抗血栓酶”（又名蛇毒抗血栓酶，Svate），于1985年通过鉴定。目前，蛇岛白花蛇的抗血栓酶因缺乏蛇毒而未获准生产来源。临床上应用最广泛的是白花蛇的清血栓酶和抗血栓酶。这些酶制剂虽然商品名不同，但都是未经纯化的成分，主要成分是精氨酸酯酶，纯度不高。除了抗凝作用外，这些酶制剂还可以增加毛细血管通透性和纤溶作用。 1997年初，卫生部药监局批准了一种新型高纯度类凝血酶制剂——去纤酶，它是一种电泳纯单组份酶制剂。目前价格昂贵，难以在临床上推广应用。江浙Agkistrodon halys的抗血栓酶已通过卫生部药品生物制品检定所验证。提取蛇毒为原料。

为了解蕲蛇毒抗凝制剂可能产生的毒性作用，对长白山蕲蛇毒制剂——清血栓酶和浙江产蕲蛇毒——抗血栓酶进行了毒性试验。

1.急性毒性试验采用小鼠腹腔注射和尾静脉注射血栓清除酶的方法测定LD5。腹腔注射药物后，发现部分小鼠30分钟内毛发蓬松、蜷缩、发抖、精神萎靡、厌食、嗜睡。 4小时后，7.2IU/kg高剂量组出现安静后死亡，大部分在6h8h内死亡。死鼠解剖发现腹膜广泛出血、淤滞，肠系膜、肝、肾、肺均有出血点，未见脑出血。根据结果，用Kou's方法计算，LD5。为5.320.15IU/kg。药物主要注入小鼠尾静脉，短时间内出现类似腹腔注射的现象。注射部位出现瘀血，3小时后死亡。 24小时后观察结果，按序贯法计算静脉给药的LD5。为3.750.84lU/kg。临床有效剂量约为0.012IU/kg，静脉给药相当于小鼠的LD50W1/200，可认为是安全的。

采用简化概率法，在小鼠尾静脉注射Agkistrodon halys抗血栓酶后，死亡最快的立即死亡，最晚为24小时。其中，出血占死亡病例的95%以上，结果显示小鼠尾部为LD5。为.060.118IU/kg。

2.亚急性毒性试验为观察连续用药后可能出现的副作用，给家兔系统给药血栓清除酶，经耳静脉给药，连续观察812周，并进行病理检查。实验过程中，观察到动物精神状态良好，体重均有不同程度增加。因长期服药，进食、大小便、体温等无异常，用药前后临床检查无明显差异。高浓度组（0.2IU/kg）谷丙转氨酶似乎升高，但无统计学意义。组织学检查发现心、肺、肾、脑、肾上腺、胃、肠等脏器，对照组与药物组无明显差异。低浓度组（0.012IU/kg）1只家兔给药12周，观察肝细胞肿胀、变性及球囊样改变。中浓度组（0.10IU/kg）停药1个月后，肝脏有不同程度的肝细胞肿胀、颗粒变性、空泡变性，但小叶边界清楚，解剖正常。高浓度组主要表现为广泛的肝小叶中心区、边缘区、中心区细胞肿胀、空泡变性、肝小叶边界不清，停药1个月后变化明显减轻。建议清血酶用量大、时间长，会对肝脏造成一定的损害，但停药一定时间后即可恢复，对肝脏的影响是可逆的。

给大鼠和家兔连续皮下注射Agkistrodon halysus 抗血栓酶3 周。给药后第3天，大鼠出现厌食、厌食、活动少等现象。 3天后活动正常，体重无明显变化，肝肾功能及血常规检查均在正常范围内。组织学检查，心脾无明显改变，肝脏无条带片状坏死。肺部有一定的出血性病灶，并有相应的肺泡出血病灶。出血例数与剂量呈平行关系，有一定比例的肺间质血管周围浸润。肾间质因给药会出现局灶性片状血浆浸润，病变程度与剂量有关。低剂量组（0.003IU/kg）无此现象，中剂量组（0.005IU/kg）和高剂量组（0.05IU/kg）有部分出现。各组弯曲导管内均有不同程度的透明管型及血管周围有不同程度的血浆浸润。但兔组肝、肾、肺等脏器无明显中毒表现，部分有出血现象，对照组与实验组无明显差异。说明在常规剂量下连续用药是安全的。

3.慢性毒性实验：连续静脉注射清血栓酶和江浙白花蛇抗血栓酶对家犬进行观察。连续使用清血酶25周，前肢或后肢静脉注射。设低浓度组（0.012IU/kg）和高浓度组（0.10IU/kg），以等量生理盐水为对照组。实验过程中，所有动物精神状态良好，体重均有不同程度增加。长期服药饮食、尿液、体温及血液、血小板、血脂、肝功能、尿素等无异常。

大体解剖检查未发现任何器官有明显损伤。组织学检查可见心脏内外层有少量散在脂肪细胞浸润，肾脏个别区域有上皮细胞质疏松等局灶性病变。肝、肺、胸膜、肾上腺、胰腺、胃肠道、脑和生殖器官未见明显病变。结果表明，凝血酶清除酶比临床剂量（0.01IU/kg）高10倍，对动物器官无损伤，长期服用无副作用。