溶血毒素的鉴定

直接溶血因子是一种作用于细胞膜的碱性多肽，分子量约为2000。眼镜蛇毒中的心脏毒素已被证明具有溶血能力，因此很多作者认为直接溶血因子和心脏毒素实际上是同一种物质。此外，在研究眼镜蛇毒液中的细胞毒素时，发现它也能直接溶解豚鼠、狗和猫的红细胞，因此认为直接溶血因子是细胞毒素。细胞毒素和心脏毒素的结构也很相似，所以有人认为它们也是同一种物质。由于化学分离分析技术进步很快，但毒理学研究没有跟上，一些具有细胞毒性的成分尚未同时进行心脏毒性试验。因此，在弄清这些问题之前，不能过早下结论。

直接溶血因子的作用有两个特点： 首先，不同种族动物的红细胞敏感性不同。豚鼠红细胞最敏感，狗、猫次之，人、兔、马、大鼠、羊、鸡红细胞最不敏感。这使人们很自然地想到，各种动物的红细胞膜成分不同，如卵磷脂与鞘磷脂的比例，可以从4:1到1:12相差很大。第二个特点是直接溶血因子的溶血作用可以是由于极少量磷脂酶A2的存在而大大增加，即两者具有明显的协同作用。其原因是直接溶血因子对红细胞脂质结构造成轻微干扰，有利于磷脂酶A2的接触，从而加速磷脂的水解。因此，当直接溶血因子与磷脂酶A2同时存在时，溶血率可提高30-50倍。磷脂水解的程度与溶血百分比完全一致。从眼镜蛇毒液中获得的磷脂酶A2能水解卵磷脂、脑磷脂和丝氨酸磷脂，但几乎不水解鞘磷脂和肌醇磷脂，这很容易解释不同动物红细胞溶血敏感性的顺序。

由于从蛇毒中分离纯化心脏毒素或细胞毒性时会有残留的磷脂酶A2，所以所显示的溶血作用与混合酶的量有关。实验表明，如果磷脂酶A2的含量降至0.001%，心脏毒素IV在浓度低于700fxg/ml时几乎不溶血。因此，心脏毒素是直接溶血因子的说法受到挑战，或者直接溶血因子这个名称本身受到质疑。但从实验证实的磷脂酶A2与直接溶血因子的协同作用来看，除磷脂酶A2外，不能排除另一种影响溶血的物质。

溶血毒素虽然具有一定的毒性，但与蛇毒中的其他毒素相比，其毒性往往要小得多，因此通常不是主要的致死成分。

溶血毒素的鉴定方法通常采用试管法，即直接观察红细胞的溶血情况。

鉴定实验常用豚鼠红细胞，也可用大鼠红细胞。用离心机将豚鼠或大鼠的新鲜血液中的红细胞分离出来，然后用生理盐水洗涤23次，这样离心后的红细胞就可以用来观察溶血情况。观察直接溶血，将红细胞悬于10倍体积的缓冲液或生理盐水中，加少许氯化钙，再加入一定量的待观察样品，37水浴30分钟， 然后使用离心。未溶解的红细胞沉淀，如果溶血强烈，离心后不会有沉淀的红细胞，如果溶血轻微，也可以看到离心后上清液中有明显的血红色，即溶解的血红蛋白。观察间接溶血，即在上述红细胞悬液中加入一定量的卵磷脂，371孵育后观察卵磷脂水解生成溶血磷脂引起的溶血现象。