治疗用抗蛇毒血清的制备

目前，世界上已有20多个国家的30多个单位生产了60多种治疗用单价、二价和多价抗蛇毒血清，达100多种。目前公认是治疗蛇咬伤的有效药物。药用抗蛇毒血清的制备原理和基本方法与实验室研究中使用的抗蛇毒血清相似，但在动物和抗原的选择上有一些不同。下面简单介绍一下它们的区别。

抗原的选择与制备用作抗原的蛇毒一般选用分布广、受害多、死亡率高、抗原谱广(即具有区域代表性)的毒蛇。用这种蛇毒制备的抗蛇毒血清不仅可以中和蛇毒，而且可以中和其他同类毒蛇的蛇毒，具有很高的应用价值和经济效益。一旦选择了要使用的抗原，下一步就是为它准备毒液。用作抗原的蛇毒一般应由专人提取，市售蛇毒常混有其他蛇毒或杂质，影响抗血清的制备。一般选用健康的毒蛇，通过咬盘挤压收集蛇毒。新鲜毒液2500r/min离心20min，取上清液冻干成粉备用。给动物免疫前，必须对蛇毒进行消毒，因为蛇毒经毒蛇口排出时，往往会感染一些致病微生物（如葡萄球菌、链球菌、破伤风梭菌、气性坏疽杆菌等。 ) 和脑炎病毒。 ）污染。蛇毒是一种复杂的混合物，一种蛇毒含有约515种酶类、312种非酶蛋白和多肽类以及至少6种其他物质。同时，与毒性相关的往往是蛇毒中热稳定的低分子多肽，其抗原性较差。如果增加免疫剂量以增强对免疫动物的刺激，则动物会在免疫过程中死亡。这个问题可以通过两种方式解决，一种是在抗原中加入佐剂，提高免疫效果；另一种是将抗原减毒，使其可以用于更大剂量的免疫动物而不导致动物死亡。常用的辅料有弗氏佐剂、可溶性淀粉、南洋面包木薯粉、可溶性羧甲基纤维素、氢氧化铝凝胶和海藻酸钠等。不完全弗氏佐剂，即羊毛脂和石蜡油，通常用于制备抗蛇毒血清。该佐剂可增强免疫功能。一般认为可延缓抗原的排泄，延长抗原刺激机体的时间。更重要的是，它能刺激网状内皮系统组织细胞的增殖，促进巨噬细胞的活力，从而提高机体的免疫力。免疫反应。抗原减毒的方法很多，目的是降低抗原的毒性但不改变或基本不改变抗原的抗原性。在光氧化减毒、过氧化、氢氧化减毒和福尔马林处理减毒等方法中，福尔马林处理的减毒效果较好。在一定浓度下，用福尔马林处理2周，可使毒蛇的大部分毒性丧失而抗原性基本不变，在免疫过程中效果满意。

马或羊可用于动物免疫制备抗蛇毒血清。最早的羊是作为实验动物使用的，但现在市售的抗血清都是用马来配制的。这是因为马体型大，采血量大，容易饲养，对蛇毒抗原敏感。马的选择主要是大而强，其他条件是次要的。选出的马匹需要进行隔离，因为有些马匹带有一定的病菌，将这种马血清注射到人体中会带来不良后果。

至于如何对动物进行免疫才能获得好的效果，这与很多因素有关，每个公司都有自己的经验。一般免疫后可对马进行多次放血，每次放血后可进行适当的免疫。马的初次免疫方法与采血后不同。初次免疫一般分两步进行，即给被免疫动物注射少量蛇毒后，让动物静置2个月左右，再进行正式免疫，逐渐增加剂量。每次间隔1周，直至免疫成功。注射部位、免疫程序、抗原剂量、采血量、休息时间和马匹选择都是需要注意的重要因素。

马被免疫一段时间后，从颈静脉采集血样以确定血清（或血浆）的滴度。经过多次检测，如果验血结果达到要求的效力，则可在最后一次注射后的几天内（通常为1 周）采血。化验血的一般要求是1ml血清加1ml，含有蛇毒（LD5。血清的验血效价达到要求的效价水平才能放血。马的颈静脉采血是用钠柠檬酸作为抗凝血剂，放血量可根据马的大小而定，一般放血8L10L，每隔3天放血一次，然后休息。离心后与血液分离，血浆加防腐剂于2至10避光保存，自分离之日起至少保存1个月，方可用于制备抗蛇毒血清。细胞可丢弃或送回原马，可使马快速恢复健康，缩短二次采血时间，避免对马造成伤害。

用于抗血清的纯化马血浆含有多种蛋白质，这些蛋白质含量丰富但效果较差。马血浆中的蛋白质是一种异质性蛋白质，如果过多进入人体，会引起不良反应，如血清病、过敏反应等。另一方面，未经处理的血浆由于蛋白质含量过多，容易变质，不易保存。现在一般的做法是纯化血浆，提取有效的免疫球蛋白IgG。不仅如此，胃酶消化还用于去除没有中和毒素作用的IgG分子的Fc部分。抗蛇毒血清的提取方法基本采用破伤风抗毒素的生产方法，即采用胃酸消化、硫酸铵沉淀、明矾吸附等工艺。该过程分为以下步骤：

(1) 消化加温： 将免疫血浆稀释23倍并调至合适的pH值，然后加入一定量的胃蛋白酶和甲苯，在一定温度下作用一定时间，然后加入15%氨水硫酸盐，调pH值至5.0左右，加热至575830min，冷却过滤，得滤液。

二次沉淀： 调15%硫酸铵滤液pH值至7.2左右，加入20%硫酸铵沉淀。明矾吸附： 二次沉淀压干后，进行明矾吸附，过滤除去其杂质，保留上清液^

最后在明矾吸附上清液中加入38%的硫酸铵进行沉淀，压干沉淀物进行透析，透析液中加入NaCl和防腐剂，稀释至一定的蛋白浓度，然后进行灭菌处理，称为半脱。完成的产品。经过严格的质检，检验合格后分装成安瓶，即为抗蛇毒血清。

由上述方法制取的抗蛇毒血清称为精制抗蛇毒血清，是目前最普遍的一种。除精制抗 蛇毒血清外，还有原制抗蛇毒血清和浓制抗蛇毒血清。前种制品实际上未经提取，仅是将 免疫血清作除菌过滤的全血清。后种制品是用硫酸铵盐析法浓缩而成的，抗体可被中性盐 沉淀。在生产上常用硫酸铵从免疫动物的血浆中沉淀出含有抗体成分的球蛋白，再经透析 除去盐类，以纯化抗体。

比较上述3种制品的效价，则精制品高于浓制品，浓制品高于原制品。至于冻干抗蛇 毒血清,则是由这些制品经冰冻干燥而成的，并不是一类新的抗蛇毒制品。