鸡马立克氏病病毒的实验室诊断

从病鸡和许多表面正常的鸡中分离病毒株并不困难。用于病毒分离的优选样品是来自脾脏或外周血的肿瘤细胞、肾细胞和白细胞。由于MDV 在这些组织中与细胞高度相关，因此必须使用全细胞作为接种物。羽毛毛囊是从病鸡中分离出的完整病毒粒子的唯一良好来源。通过接种易感鸡、细胞培养物和鸡胚胎，可以从疑似含有MDV的样本中分离出病毒。

小鸡疫苗接种法：这是分离MDV最敏感的方法。选择易感鸡，在1日龄或1周龄内腹腔接种感染，然后严格隔离饲养观察。疫苗接种后18-21天，检查试验鸡以及相应的阳性和阴性对照鸡是否有感染迹象。审判应持续至少10 周。

细胞培养法：该方法虽然不如小鸡疫苗接种法灵敏，但简单易行，仍具有很大的实用价值。首先，必须制备鸭胚胎成纤维细胞或鸡肾细胞的培养物。最合适的接种物是白细胞、肿瘤细胞或血液。 5 至14 天之间出现典型的MDV 斑块（但在对照培养物中未见），是MDV 已被分离的证据。该特征性斑块由圆形和纺锤形屈光细胞和含有牛型核内包涵体的多核细胞组成。

鸡胚接种方法：通过卵黄囊或绒毛尿囊膜途径接种病毒的鸡胚，分别在接种后4-6天或10-11天绒毛尿囊膜上产生痘样病变。

在实验室诊断中，MD的血清学检测通常采用琼脂凝胶免疫扩散试验来检测MDV抗原及其沉淀的抗体。采用荧光抗体法或酶抗体法检测病鸡组织中的病毒抗原和肿瘤细胞上的肿瘤相关表面抗原（MATSA）。还可以检测血清抗体。使用已知的MD阳性血清进行琼脂扩增试验来检查羽毛毛囊抗原，操作非常简单。从被检查的鸡身上拔出几根含有羽髓的羽毛，剪掉含有羽髓的部分，放入一个绿色小瓶中。用玻璃棒适当挤压提取后即可用于测试。该方法灵敏度很高。人工感染MDV的鸡，接种后20天羽毛骨髓抗原阳性率可达90%以上。利用已知的MDV抗原进行琼脂扩增试验检测血清抗体的方法，可用于免疫诱发性疾病的诊断，也可用于流行病学调查。

病毒中和试验（VN）或空斑减少试验可用于检测感染鸡血清中的中和抗体。