杜鹃花组织培养技术（上）

杜鹃花是杜鹃花科杜鹃花属的常绿或落叶小灌木。具有品种多、开花早、花色丰富、花期长等特点。近年来，由于扦插繁殖技术的发展，我国杜鹃花的产量有所增加。但名贵品种由于母本少、繁殖系数低，仍然不能满足社会的需要。组培是实现杜鹃花苗木产业化栽培的有效措施。现简要介绍如下： 一、杜鹃花组培的基本技术环节杜鹃花组培，常用的外植体有茎尖、茎节和花芽。因为花芽分化比较困难，周期长；茎尖的材料有一定的局限性，因此我国多采用茎节作为外植体进行原代培养。杀菌处理时，杀菌能力强的氯化汞（氯化汞）易引起外植体材料褐变死亡，故不宜使用。试验表明，用饱和次氯酸钙溶液上清液或5%次氯酸钠溶液作灭菌剂效果较好，处理时间为1520分钟。为增强杀菌效果，还可加入1%克菌丹或0.1%吐温20（山梨糖醇）配合使用。材料灭菌前的预处理，一般用70%的酒精浸泡不超过30秒。此外，用中性洗涤剂对物料进行预处理，也能有效降低灭菌后的污染率。外植体消毒过程为：洗衣粉浸泡20分钟，流水冲洗至清澈，70%酒精浸泡30秒，无菌水冲洗1分钟，5%次氯酸钠浸泡15分钟，用无菌水冲洗3次，每次1分钟。这样，外植体的污染率可以降低到15%以下。杜鹃组织培养所用培养基为安德森改良MS培养基：MS培养基中硝酸铵和硝酸钾的用量分别减至1/4，取消碘化钾，铁盐用量增加一倍。由于杜鹃属植物原产于高山酸性土壤，因此培养基的pH值应为5.0至5.4。培养室温度25，光照强度3000lux，光照时间1214小时。杜鹃花在芽诱导培养中使用的激素与普通植物不同，需要更多的活性细胞因子才能达到满意的效果。试验表明，以ZT催芽效果最为显着；加KT处理几乎没有丛生芽和侧芽，只有原茎尖伸长；而使用6-BA处理会导致培养物的褐变加剧，效果反而更好。另外，在后续的增殖培养中，杜鹃花对细胞因子种类的要求，还是加入ZT比较好。 2ip在国外杜鹃花组培中常作为外源细胞因子使用，效果优于ZT。不过从经济角度来说，还是推荐ZT。 2、杜鹃花原代、次代增殖栽培。初生杜鹃NAA浓度不应超过0.1mg/L。增加ZT用量可明显促进芽诱导效果。但增加ZT浓度时，NAA浓度不能同步增加，ZT/NAA值越大越好。从经济栽培的意义上讲，原代培养适宜的激素配比为ZT5+NAA0.01（mg/L）。经过一个月的培养，发芽诱导率可达100%，发芽诱导系数为6.5。杜鹃花亚培养物比原代培养物需要更少的细胞分裂素。虽然随着ZT用量的增加，增殖效应仍然增强，但不如原代培养时明显。此外，增殖培养所用材料的性质不同，其增殖效果也不同，品种间也存在显着差异。供试品种中，'小桃红'在丛生芽作繁殖介质时增殖系数较高（7.6）；而“花春雨”则相反，使用芽条时反应较好（7.5）。杜鹃花组培从接种到诱导出芽所需时间明显长于玫瑰和菊花，因此其传代繁殖周期也更长。试验中分别以30天和45天作为培养周期进行统计。在各种激素水平的配比处理中，45天培养的增殖芽总数比30天提高了50%80%。因此，在杜鹃花组培过程中，过于频繁的剪枝和切换培养将达不到快速繁殖的目的。 3、试管苗的生根培养和移栽杜鹃的生根培养虽然难度不大，但对培养基的要求与普通植物还是有区别的。

首先，基础培养物中无机盐和常量营养素的量不能减半；第二，蔗糖的用量仍为30g/L，生长素NAA的添加量以1.52.0mg/L为宜。培养45天后生根率约为60%。生根培养的试管苗应高15厘米以上，真叶7片以上，健壮。生根培养2周后见根，6周时生根率最高。实验中发现，在增殖培养过程中用KT或6-BA代替ZT时，虽然诱导和增殖效果较差，但芽条发育较粗。因此，增殖培养达到一定群体规模后，用KT或6?BA进行继代处理，可显着提高生根率和移栽成活率。此外，在生根培养基中添加2g/L活性炭，可显着促进试管苗个体发育，1个月后生根率可达90%以上。国外研究资料表明，一些在常规繁殖（插条）中极难生根的植物，在组培后获得的试管苗中生根会容易得多。有的无需生根培养，可直接移栽到生根培养基中，生根率可达100%。 34周后，即可移入温室进行盆栽。这种生根介质是泥炭土、蛭石和珍珠岩的混合物，pH值以44.5为宜。 （扬州大学农学院）