培养室又称恒温室，用于培养接种后的各级菌株。培养室必须提供适宜的温度和通风条件，以促进菌丝体的良好生长发育。培养室的大小和数量取决于生产规模。栽培室必须有良好的保温结构，门窗必须能够关闭严密。最好做双层门窗和夹层墙。夹层内填充木屑、谷壳、玻璃纤维或泡沫塑料等绝缘材料。栽培室门上最好挂上棉帘，防止冷空气进入栽培室。如果在室内使用电炉提供热源，需要配置电子继电器和导电温度计，可以自动调节培养室温度，不仅非常方便，而且可以保持恒温温度。也可用木炭炉提供热源，但必须注意将木炭在室外燃烧时产生的二氧化碳气体排出。气温高时，可用空调进行温度调节和栽培。培养室要求进行消毒和清洁。进入修炼室需要换鞋。应使用蘸水的拖把清洁室内地板。不宜用扫帚打扫房间，以免灰尘中的细菌孢子四处飞扬，影响细菌的正常培养。为充分利用空间面积，应在培养室内放置菌种架。木框或铁框都可以，5-6层比较合适。
恒温培养箱用于培养母种和少量原种。培养箱的功能与培养室相同。因其体积小、设备齐全，可根据需要在一定范围内保持温度恒定，箱内各部分温度几乎一致，比接种室温度调节更恒定.
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