无需灭菌培养液生产北虫草液体菌种及栽培试验

我国是食用菌和药用菌生产大国。长期以来，应用的菌株主要是固体菌株。自20 世纪80 年代以来，液体菌株已在一些大学实验室中进行了小规模测试。 1990 年代后，行业出现液体压力。种子培养箱（发酵罐）出现，培养基经过高压高温灭菌。冷却后接种进行深层发酵，形成菌丝体（球体），应用于食用菌和药用菌的培养，效果优于固体菌种。经过几年的研究，我用适量的专用杀菌剂对培养基进行处理，没有采用高温高压灭菌的方法生产食用菌栽培用液体菌种。在此基础上，我还对蛹虫草进行了栽培试验。其出品质量达到常规发酵罐高温高压灭菌的效果。不灭菌培养基生产液体菌种的成功，填补了国内外食用菌液体菌种生产领域的技术空白。在第四届全国食用菌产业化大会上，与会者分享了这项新技术。一、不经高温灭菌的蛹虫草液体菌种的生产不经灭菌的蛹虫草液体菌种的发酵过程包括试管斜面培养、三角瓶通风培养、15L发酵罐容器培养。发酵过程为：试管母种驯化取培养基不灭菌静置三天发芽通气扩大培养1、菌种来源：上海市农科院菌种厂2、配方液体菌种培养基： 白糖1.5%、葡萄糖1.5%、马铃薯淀粉0.2%、琼脂0.01%、蛋白胨0.05%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、B10.01%、食用油0.03%（或聚氧丙烯甘油0.03%）。 3、发酵液的配制：自来水培养液+专用杀菌剂。 4、发酵容器：采用2500ml吸滤瓶（可接2500瓶培养材料），上盖配有橡皮塞。 18.9L饮水桶（可使用15000瓶栽培料）用于菌种繁殖，拆掉原封口，配橡皮塞。在过滤瓶的橡胶塞上钻两个孔，并安装一根8mm 的铝管。安装管子时，将过滤瓶的短管与瓶塞下部内口平行，以利于排气。另一根长管距瓶底5mm。过滤瓶本身有一个透明的排气嘴，可以用来排出液体细菌。饮水桶的胶塞上打三个孔，用于繁殖细菌，一短一长，便于进气、排气和接种。然后准备好几米的硅胶管和几个三通，用于连接管道。 5、接种培养：按配方比例称取所用原料，加入定量自来水中，盖好一级种子瓶塞，放入蛹虫草试管斜面进行24小时，种子块大小为0.50.5cm，每瓶接试管（无菌条件下接种），22-24培养3天。当液面长出新的菌丝和分生孢子时，进行送气培养，22-24培养3天，待瓶内含菌量达到80%-90%时，转移至膨胀容器中进行培养。培养48-60h，即可生产。二、免灭菌蛹虫草液体菌种生产工艺的技术要点： 1、提高蛹虫草液体菌种含量的措施有以下三点： 合理配制培养基，适当提高培养基浓度。 加入少量热水溶解培养基中的固形物，与自来水一起放入发酵容器中。由于培养基中的固形物未经高温灭菌，蛋白质不会变性，减少不溶性物质的形成，防止褐色素的增加，有利于蛹虫草菌体酶的分泌增强蛹虫草菌丝体分生孢子的繁殖。 适当延长发酵时间，充分利用蛋白质、氨基酸、糖类、碳水化合物等营养物质，使菌丝生长达到最高。 2、提高蛹虫草液体菌种纯度的三个措施：母种必须驯化、提纯，选择分生能力强、生命力旺盛的菌种。 液体菌种培养过程中，应定期用臭氧对环境进行消毒，保持环境清洁。空气过滤系统采用消毒液二次循环进入发酵容器，使用前所有管路用正压无菌空气吹扫半小时以上。 培养基进入发酵容器时，加入适量的专用杀菌剂。这三项措施使得北冬虫夏草在发酵过程中无需对液态菌种进行灭菌处理，菌种纯度可达100%。

三、北虫草栽培技术1、栽培设置：栽培室应设有温控、加湿、通风系统。室内应有置物架，置瓶架宽25厘米，高25厘米。每条过道的长度为1m，过道之间的距离为1m。 2、培养基配制：以大米、小麦、蚕蛹粉为主要原料，营养液按以下配方配置：蔗糖1.5%、葡萄糖1.5%、磷酸二氢钾0.1%、0.05%硫酸镁。准备时，将小麦（或大米）放入栽培容器中。罐装瓶装30-50g/瓶，塑料盒装300-500g/箱，然后加入营养液。料水比为1:1.5。瓶口用压克力膜封口，盒口用通气盖封口。 3、灭菌接种：将包装好的小麦（或大米）瓶、盒密封，高压高温灭菌。灭菌温度为126，灭菌时间为4小时。种类。接种前用经1:5倍处理的自来水稀释，使用专用接种工具，每瓶5-10ml，每盒100ml，均匀喷洒在材料表面。 4、养草：将接种好的菌瓶或盒整齐地放在培养架上，打扫房间，用臭氧（10-20mg/m3）消毒40分钟。前期室内温度应保持在15，空气相对湿度为60-70%。当菌瓶、菌盒内有白色菌丝或分生孢子时，将室温提高至20-22，可减少污染，有利于细菌的生长。接种后10-15天，菌丝体基本通过堆肥生长。此时开灯，在植瓶封口膜上扎3-4个孔。箱栽时，应拔掉通气塞。每天光照时间不少于10小时，室温18-20，地面喷水诱导变色和杂草，室内定期通风。 3-5天后，培养物表面由白色变为橙色，即可形成原基。空间湿度保持在90%左右，每天延长通风时间。当蛹虫草子实体长到7-8厘米，甚至长到10-12厘米，头部有明显的纹路时，就可以采收了。转化率可达80-90%，干品可达13%左右。 5、采收、晒干：北虫草成熟子实体采收后，去除根部杂质，选出无异物的子实体，放在竹制或不生锈的金属筛网上吹2小时，然后晒干，烘干温度不宜过高，温度由低到高逐渐升高，从35到60，烘干过程中要注意除湿。这样烘干后的产品色泽好，品质高，有条件的种植企业可以采用微波烘干，效果更佳（严禁阳光暴晒）。