食用菌菌种保藏

优良菌种选育后，必须保持其优良性状，防止杂菌污染，以免降低生产性能。因此，保存优良菌种对食用菌的研究和生产具有重要意义。菌种保存方法有斜面低温、砂土管、液体石蜡封口、冷冻真空和液氮超低温等。

这是最简单、最常用的保存方法，即菌种在适宜的斜面培养基上培养成熟后，置于4-5低温保存，每2-3个月转移一次。本方法适用于除草菇外的所有食用菌菌种。草菇耐低温性差，5时菌丝体易死亡，因此菌种应在10-13'(2.如果需要低温放置温度4-5 为保鲜，应在草菇菌苔上浇34mL防冻液。一般生产中，草菇多在室内常温下贮藏。

冻存菌株的培养基一般采用营养丰富的天然培养基，如马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基。为防止细菌在保存过程中产酸过多，配制保存培养基时应加入少量缓冲盐，如磷酸二氢钾（KH2P04）或碳酸钙。

斜面低温保存菌种虽然简单方便，但保存时间短，需要经常换管，容易发生降解。为了弥补这一缺点，在生产上，最好将斜坡超低温保存法与其他保存方法结合起来，以减少转管次数。第一次转移亲本时，尽可能多地移动倾斜的试管，其中一部分用于第一次生产，取几管进行矿物油保存（或冷冻干燥、液氮冷冻保存），以及其余用于后续批次的生产。亲本种暂存于4-6的低温下。低温保藏的菌种用完后（或超过保藏期后），将第一代矿物油中保藏的菌种取出再繁殖。这样做可以使每批次生产使用的菌种保持在前几代的水平，有利于菌种优良性状的保持（图3-1）。

液体石蜡保存

食用菌菌丝可以在石蜡中保存，一般可保存3年以上，但最好1-2年移植一次，即使不移植，常温下也可保存6-8个月。用这种方法保存的菌种无需放入冰箱，室内保存效果优于冰箱。

液体石蜡，也称为矿物油，是一种在药店出售的泻药。分装锥形瓶，用棉塞密封，高压蒸汽灭菌23次（每次30分钟），无菌试验合格后使用。因高压蒸汽灭菌常有水汽渗入，需在4'C培养箱或烘箱中烘烤8-10小时，使水分蒸发。用灭菌吸管在待保存培养物的斜面试管中加入灭菌石蜡，用量应高出斜面尖端1cm左右。将卫生棉条的口切平，用蜡封住管口。

使用矿物油保存菌种时，不必将矿物油倒掉。用接种工具从斜面上取一小块菌丝体，先放入无菌水中。

在培养基中洗涤，然后转移到倾斜培养基中。原始母种可以重新密封以进一步保存。

沙子保存法

这种方法是将食用菌孢子保存在干燥无菌沙土中，保存期为2至10年。具体方法如下：

1、取河沙过筛（60-80目筛）去除大沙粒，用10%盐酸浸泡去除有机物。盐

酸用量以淹没砂面为宜。浸泡2-4小时后，倒掉盐酸，用水多次洗涤至接近中性，晾干或晒干

干燥。

2、沙土比例宜为2：14：1。沙子过多会影响菌种的保存质量。

种植后排水困难。

3.将干沙和土按比例混合，压入安瓶或小试管中，最好0.5-lcm，加棉塞，

高压灭菌（压力0.15MPa）3次，每次30min，干热灭菌（160，2h）。等待无菌测试

检查合格后（取少许干沙放入牛肉汤培养液中，无菌生长）方可使用。

4、用接种环将孢子接在砂管上，混匀。或将孢子放入接有5mL无菌水的试管中，

将悬液中的孢子充分播种，然后用1mL无菌移液管吸取孢子悬液加入砂管中（每管0.2mL）

就是这样。

5. 将接种后的砂管放入盛有干燥剂（生石灰、氯化钙或硅胶）的容器中，并连接到

0.5KW真空泵抽气约8小时，使沙子基本干燥。

6、抽检后证明无杂菌滋生，可密封保存。

四、真空冷冻干燥保存法

该方法采用真空、干燥、低温三种方式保存菌种，菌种保存期长达10-20年，仍不降低其原有性能。

冷冻干燥保存的基本方法是将需要保存的孢子悬液置于特制的安瓿管中，然后急速冷冻，并立即抽真空，使培养物升华脱水呈固态，融化后在低温或室温下保存。

试验表明，蘑菇、香菇、侧耳、金针菇等食用菌的孢子和银耳的孢子用此法保存3年，全部成活，8年后成活率达90%。由此可见，用这种方法保存的食用菌孢子至少可以存活8年。但是，这种方法不能用于保存不长孢子的真菌。

其他保存方法

(1)液体冷冻保存法

试验证明，所有食用菌菌种都可以在130-196的液氮超低温冰箱中保鲜，包括一些冷冻干燥无法保鲜的菌种。 %二甲基砜作为保护剂，也可在超低温冰箱中保存。由于超低温可以将代谢水平降到最低，菌株基本不会发生变异。

使用液氮冻存菌种时，应将安瓿管置于35-40的温水中，使管内的冰块迅速溶解，然后打开安瓿管，将悬浮的菌丝块移入文化基地的激活文化。

(2)菌丝体生理盐水法

首先将食用菌菌种进行液体振荡培养3-7天，然后将形成的菌丝球吸入装有5mL无菌生理盐水的试管中，每管转移约4-5个菌丝球。试管用无菌橡皮塞塞住，蜡封口，室温或4保存。一般可保存12年。

(3)小麦籽粒保藏方法

粮食保鲜法是用麦粒作堆肥。用于保存菌种的麦粒含水量在25%左右。这样的谷物，