食用菌菌种贮藏8法

1、低温定时移栽贮藏法： 将拟贮藏菌种接种于适宜的斜面培养基上，在适宜的温度下培养，待菌丝在斜面上长势旺盛时取出，置于低温干燥处3-5或4冷藏、冷冻保存，每4-6个月进行一次移植、转管，具体时间根据菌株特性而定。存放时注意环境温度不要过高，防止霉菌通过棉塞进入管内。因此，如果使用卫生棉条，可以用干净的硫酸纸或牛皮纸将卫生棉条包裹起来，这样可以减少污染的机会，也可以防止介质变干。除草菇菌种外，其他食用菌菌种均可采用此法贮藏。 2、液体石蜡贮存方法： 取化学纯液体石蜡（要求无水分、无霉变）放入三角瓶中，加棉塞用纸包好，1kg/cm2压力灭菌静置1小时，然后放入40恒温箱中放置数天，蒸发水分至石蜡油完全透明。将处理后的石蜡油转移至空白坡，28-30培养2-3天，确认无杂菌生长后方可使用。然后用无菌方法将液体石蜡注入斜试管中保存。注射量应高出培养基斜面1-1.5cm，用橡皮塞塞住，固体石蜡密封，直立低温干燥处保存。贮存时间1年以上，低温可延长贮存时间。 3、砂管贮法： 取河沙用水浸泡数次，过60目筛除去粗颗粒，再用10%盐酸浸泡2-4小时，除去有机物，然后用水洗涤至PH值达到中性。晾干备用。同时，将贫瘠的垄土或菜园土用水浸泡至中性，沉淀后去上清液，晒干研磨细，过100目筛，用（2-4）处理后的沙土如下： 1 混合均匀，用磁铁吸出铁质，装入小试管或安瓿瓶中，每管0.5-2克，塞上棉塞，用纸包好，消毒（1.5 kg/cm2，1小时），再干热灭菌（160，2-3小时）1-2次，进行无菌试验，合格后使用。在无菌条件下，将3-5毫升无菌水注入已形成孢子的倾斜菌株中，刮去菌柄，制成菌悬液，然后用无菌吸管将菌液吸入沙管中，将沙子浸透直至。将接种后的砂管放入装有干燥剂的真空干燥器中，接上真空泵抽气数小时，直至砂干。真空干燥操作应在孢子插入后48小时内完成，以防止孢子萌发。制好的砂管用石蜡封口，低温保存2-10年。 4、滤纸片保存方法： 取白色（收集深色孢子）或黑色（收集白色孢子）滤纸，剪成4cm0.8cm的小条，平铺于培养皿中，用纸包好用于灭菌（1 kg/cm2，30 分钟）。用钩悬法收集孢子，让孢子落在滤纸条上。将载有孢子的滤纸条放入保存试管中，然后将保存试管放入干燥器中1-2天，以除去滤纸的水分，使滤纸的含水量达到2%左右， 然后低温保存。 5.天然基质贮藏法： 粮食贮藏法。取没有瘪粒和杂质的小麦，洗净，浸泡12-15小时，加水煮沸15分钟，继续热水浸泡15分钟，使麦粒膨胀不破，沥干水分，摊开晒干，增加麦粒的含水量。约25%。将碳酸钙和石膏混合成熟麦粒（麦粒、碳酸钙、石膏的比例为10公斤：133克：33克），拌匀后放入试管中，每管2-3克，然后清洁试管。塞满卫生棉条，灭菌（1.5kg/cm2，2小时），无菌试验合格后静置，冷却后接种试管底物，在适宜温度下培养，待菌丝体布满后，在卫生棉条上涂上石蜡。基材低温保存。每2年左右转移一次。 麸皮保存法。取新鲜麸皮过60目筛，除去粗粮。将麸皮和自来水按1：1的比例混合，放入小试管中，每管装满约1/3高度，加棉塞并用纸包好，高压灭菌（1.5kg/cm2，30分钟),无菌检查合格后方可使用。将在倾斜培养基上生长的健壮菌株移植到无菌麸管中。移栽时注意将小试管内的麸皮尽量捣碎，使其松散。低温培养至菌丝体布满麸皮，将小糠管放入干燥器中，低温或中温保存。

六、生理盐水贮存法： 取纯氯化钠0.7-0.9克，放入100%毫升蒸馏水中，搅拌均匀，分装试管，每管5-10毫升，灭菌（1公斤/平方厘米， 30分钟），无菌试验合格后待用，将待保藏菌种置于马铃薯葡萄糖液体培养基中，在适宜温度下振荡培养5-7天。无菌操作吸取少量培养菌，注入合格的生理盐水试管中，用无菌橡皮塞塞住，石蜡密封，常温或低温保存。 7. 冷冻真空干燥法： 将培养大量生长的细菌或孢子悬浮于灭菌血清、蛋清、脱脂牛奶制成的菌悬液上，分装于无菌容器中的玻璃安瓿瓶中，每管0.3-0.5ml，然后用耐压胶管连接冷冻干燥装置，将安瓿放入-30至-40的冷冻罐中快速冷冻，然后在冷冻状态下抽真空干燥，放置在冰箱里。安瓿在真空状态下熔封并在-20C下储存。一般可存放10年以上，但成本相对较高。 8、液氮冷冻保存法： 先配制待保存菌悬液，再配制安瓿瓶，每瓶加入冷冻保护剂10%（体积比）甘油蒸馏水0.8ml，用棉塞（1kg/cm2 ， 5分钟）。无菌检查后，放入待贮藏菌种，瓶口火焰熔化，检查是否漏气，将密封的安瓿瓶放入冷冻室，以每分钟1的速度缓慢降温，使保存的藏品逐渐均匀冷冻至-35，以后不再需要控制冷冻速度。安瓿冷冻后立即放入液氮罐中，在-150至-196的低温下保存。这种方法只有少数科研院所使用。