菌种沙土保藏法

(1)取河沙加10%稀盐酸，加热煮沸30分钟，除去有机物。 (2) 倒掉酸水，用自来水冲洗至中性(3) 晾干，用40目筛子筛去粗颗粒，备用。 (4)另取非栽培层中不含腐殖质的薄黄土或红壤，加自来水浸泡洗净数次至中性。 (5) 晒干、粉碎，过100 目筛，去除粗颗粒(6) 按黄土一比沙三份的比例（或根据需要其他比例，甚至全沙或全土均可） ) )混匀，装入10100mm的小试管或安瓿瓶中，每管约1g，塞满棉塞，灭菌干燥。 (7)无菌检验取样，每10个砂管取1个，将砂倒入肉汤培养基中，37培养48小时，如仍有细菌，需重新全部灭菌，使用前进行细菌测试，直到证明无菌。 (8)选择培养成熟(一般指孢子层生长丰满，营养细胞用此法无效)的优良菌种，用无菌水洗涤，制成孢子悬液。 (9)在每个砂管中加入约0.5ml的孢子悬液(一般以砂子润湿为宜)，与接种针混合均匀。 (10) 放入真空干燥器中，用真空泵吸干水分。晾干时间越短越好，一定要在12小时内晾干。 (11)每10个取1个，用接种环取出少量沙粒，接种于斜面培养基上，培养观察生长情况及有无杂菌生长。如果较长，则说明制作的砂管有问题，需要进一步抽检。 (12) 检查无问题后，将喷头用火焰封住，放入冰箱或室内干燥处保存。每六个月检查一次活力和杂菌。 (13)需用菌种。复活培养时，取少许沙子移入液体培养基中，放入培养箱中培养。这种方法多用于霉菌、放线菌等能产生孢子的微生物。因此在抗生素的工业生产中应用最为广泛，效果也较好。可保存2年左右，但应用于营养细胞效果不佳。