北虫草液体菌种制作方法

如何制作和培育蛹虫草菌种？蛹虫草是一种结合昆虫和细菌的食用菌，富含虫草素和含氧酸等营养物质。由于其营养成分种类多、含量高，是人们生活中的上等滋补佳品。其市场销量一直较好，人工种植前景看好。今天给大家介绍一下北虫草液体菌种的制作方法，如下：

一、培养基配方

配方：1%玉米粉、2%葡萄糖、1%蛋白胨、0.5%酵母粉、0.1%磷酸二氢钾、95.35%水、0.05%硫酸镁、10mg维生素B1，调pH值至6.5左右。

二、生产栽培方法

1、制作一等摇瓶：将这些原料溶于水，放入500ml的锥形瓶中。每个锥形瓶的容积为200 毫升。放入3颗左右玻璃珠，拧紧棉塞，再用4层纱布包好。盖上棉塞，将瓶子系紧，放入高压灭菌器中消毒。当压力表升至0.5kg/cm2压力时，放气至指针降为0，然后关闭放气阀。温度计指针逐渐上升到1.1kg/cm2后，开始保温30分钟，然后慢慢将指针降到0，然后开盖冷却至室温，移入接种箱或超净工作台等待接种。

2、接种方法：先将灭菌后的蛹虫草液体培养基放在超净工作台上，将蛹虫草亲本、接种钩、酒精灯、酒精棉球等接种物品放在超净工作台上.洁净工作台上，接种室悬挂工作服进行消毒。然后在接种室内点燃气雾剂（最好使用臭氧消毒器），立即关闭所有门窗进行密闭消毒，同时打开紫外线灯。 40分钟后，将烟雾熄灭，关闭紫外线灯，接种人员即可开始接种。接种方法是穿上工作服，打开超净工作台风扇，点亮酒精灯，左手持母种试管对准火焰口，手握铁钩右手酒精灯火焰消毒3-5秒后立即插入母种。将菌种在种子试管中分成5-7份，然后左手快速打开纱布瓶盖，右手立即将菌种钩入瓶中（0.5平方厘米菌种5-6种在每个瓶子中）快速将瓶子按原样盖紧。

蛹虫草菌种接种后，移入22-24恒温培养室，摇动摇床开始培养。摇床转速为140r/min。菌培4-6天后，蛹虫草菌液颜色开始变清澈，菌球密集，瓶口有浓烈的蛹虫草气味，即可判断为一个很好的应变。如果发现瓶内含菌浓度低，有异味，有五颜六色的菌液，说明有细菌污染，切不可使用。

3、制作二级摇瓶：培养基同级，用5000ml三角瓶，容量2000ml蛹虫草液体菌种，灭菌冷却后，将一级摇瓶种入大摇瓶按10%无菌操作，22-24，140r/min振荡培养72小时，菌球大小均匀，密度80%以上，菌液澄清，气味芳香，而且没有污染，是合格的菌株。由于5000ml大摇瓶体积较大，无法放入便携高压锅，用大锅太浪费了。为解决大摇瓶灭菌难题，华山食用菌研究所研制出100升立式电加热自控高压灭菌锅，一次可灭4个5000个大摇瓶。同时研制出可同时摇动5-7瓶5000ml大三角瓶的摇床，轻便、无噪音、能耗低。

4、菌种稀释：配制好的虫草菌液菌种在接种前需要进行稀释，以扩大接种规模。稀释倍数根据接种平板数稀释5-8倍。用稀释罐稀释时，按照液罐排空和实际消毒操作规程进行：

(A) 发酵罐的空灭菌

发酵罐除污（内胆、过滤器、管道消毒）是对发酵罐设备进行灭菌处理的过程。对于一周不用或空压机（气泵）因停电停用的发酵罐，所有罐体都需要进行发酵罐排空操作，具体操作方法：

(1)关闭发酵罐，除夹套排气阀外的所有阀门，拧紧发酵罐盖。

(2)接通电源，打开控制柜“杀菌”按钮，此时进入杀菌状态。

(3)当温度升至100，蒸汽从夹套中冒出时，关闭夹套排气阀。此时，提高夹套的温度和压力。当夹套压力达到0.05Mpa以上时，慢慢打开夹套阀门进入过滤器。打开过滤器尾阀。

(4)当过滤器冷凝水排出并有蒸汽冒出时，微开过滤器尾阀，慢慢打开进水阀尾阀，排出气管中的冷凝水，慢慢打开进水口冷凝水排出后打开阀门，让蒸汽慢慢进入水箱。

(5)微开发酵罐排气阀，缓慢排出发酵罐内的冷空气。在整个除气过程中，控制发酵罐排气阀，使少量蒸汽通过发酵罐排气阀。

(6)当控制柜温度接近123，发酵罐内压力接近0.12Mpa时，慢慢打开接种管末端，待接种管内冷凝水排出后，确保末端有少量蒸汽冒出，保证蒸汽循环。

(7)当温度达到123，发酵罐压力达到0.12Mpa时，控制柜开始倒计时，屏幕显示温度和倒计时时间。当倒计时时间为0时，控制柜自动报警，此时空气消毒结束。

(8)排空后，关闭发酵罐加热棒，关闭夹套入口过滤阀、发酵罐进料阀、发酵罐接种阀、接种管路末端阀。微开发酵罐排气阀、夹套排气阀、发酵罐进气阀尾阀，使夹套和发酵罐压力缓慢下降。当过滤器压力即将释放时，开启空压机（气泵），使空气流过过滤器，通过过滤器的空气在过滤器进气阀的尾阀处排出发酵罐，将流过过滤器的空气吹在滤芯上30分钟，使吹出的空气没有水分即可使用。

(二)发酵罐实际消耗

(1)定量加入清水后，打开夹套排气阀和发酵罐排气阀，接通电源，按“杀菌”键进入杀菌状态。

(2)当温度升至100，蒸汽从夹套中冒出时，关闭夹套排气阀，微开发酵罐排气阀。排出罐内冷空气，保证蒸汽循环。

(3)

    注意：计时开始时和灭菌即将结束时需要对发酵罐进行排水操作，微开接种阀门，有少量气、水排出即可，每次排水时间3-5min。排水的目的一是排出阀门处的生水；二是对阀门管路进行灭菌。

定量加入清水123℃灭菌40分钟，冷却至20度，使用空压机保持正压，无菌操作方法倒入摇瓶种，无菌空气搅拌均匀，罐内升压至0.5mpa接种（接种与液体接种操作相同），接种量50-60ml。接种后18-21℃避光培养，好的菌种7-10天封满料面。