北虫草液体菌种制作技术

一、培养基配方

配方：1%玉米粉、2%葡萄糖、1%蛋白胨、0.5%酵母粉、0.1%磷酸二氢钾、95.35%水、0.05%硫酸镁、10mg维生素B1，调pH值至6.5左右。

二、生产栽培方法

制作一流的摇瓶：将这些原料溶解在水中，放入500ml的锥形瓶中。每个锥形瓶容量为200ml，放入约3颗玻璃珠，塞紧棉塞，然后盖上4层纱布，拧紧棉塞和瓶口，放入高压灭菌器中进行消毒，当压力表上升到0.5kg/cm2压力时，解除冷气，待指针降到0后，关闭放气阀，等待温度表指针逐渐上升到1.1kg后/cm2，开始保温30分钟，然后慢慢将指针降到0，然后打开盖子冷却至室温，然后移入接种箱或超净工作台等待接种。

接种方法：先将灭菌后的蛹虫草液体培养基转移到超净工作台上，将蛹虫草母种和接种钩、酒精灯、酒精棉球等接种物品放在超净工作台上。台上，接种室挂着工作服进行消毒。然后在接种室内点燃气雾剂（最好使用臭氧消毒器），立即关闭所有门窗进行密闭消毒，同时打开紫外线灯。 40分钟后，待烟雾散去，关闭紫外线灯，接种人员即可进行接种。接种方法是穿上工作服，打开超净工作台风机，点亮酒精灯，左手持母种试管对准火焰口，手握铁钩插入酒精灯火焰消毒3-5秒后立即右手插入母种。将试管中的细菌分成5-7份，然后用左手快速打开纱布瓶盖，右手立即将一片细菌钩入瓶中（5-6片0.5平方厘米的细菌在每个瓶子）迅速将瓶盖按原样紧紧贴合。

蛹虫草菌种接种后，移入22-24恒温培养室，摇动摇床开始培养。摇床转速为140r/min。菌培4-6天后，蛹虫草菌液颜色开始变清澈，菌球密集，瓶口有浓烈的蛹虫草气味，即可判断为一个很好的应变。如果发现瓶内含菌浓度低，有异味，有五颜六色的菌液，说明有细菌污染，切不可使用。

制作二级摇瓶：用同级培养基，用5000ml三角瓶，容量2000ml蛹虫草液体菌种，灭菌冷却后，将一级摇瓶种放入大摇瓶中按10%无菌操作，22-24，140r/min振荡培养72小时后，菌球大小均匀，密度在80%以上，菌液澄清，气味芳香，且无污染，为合格菌种。由于5000ml大摇瓶体积较大，无法放入便携高压锅，用大锅太浪费了。为解决大摇瓶的杀菌问题，可采用100升立式电加热自控高压杀菌机，一次可杀菌4个。 5000 个大摇瓶。

菌种稀释：制备好的虫草液体菌种在接种前需要进行稀释，以扩大接种规模。稀释倍数根据接种平板数稀释5-8倍。用稀释罐稀释时，按照液罐排空和实际消毒操作规程进行：

(A) 发酵罐的空灭菌

发酵罐除污（内胆、过滤器、管道消毒）是对发酵罐设备进行灭菌处理的过程。对于一周不用或空压机（气泵）因停电停用的发酵罐，所有罐体都需要进行发酵罐排空操作，具体操作方法：

(1)关闭发酵罐，除夹套排气阀外的所有阀门，拧紧发酵罐盖。

(2)接通电源，打开控制柜“杀菌”按钮，此时进入杀菌状态。

(3)当温度升至100，蒸汽从夹套中冒出时，关闭夹套排气阀。此时，提高夹套的温度和压力。当夹套压力达到0.05Mpa以上时，慢慢打开夹套阀门进入过滤器。打开过滤器尾阀。

(4)当过滤器冷凝水排出并有蒸汽冒出时，微开过滤器尾阀，慢慢打开进水阀尾阀，排出气管中的冷凝水，慢慢打开进水口冷凝水排出后打开阀门，让蒸汽慢慢进入水箱。

(5)微开发酵罐排气阀，缓慢排出发酵罐内的冷空气。在整个除气过程中，控制发酵罐排气阀，使少量蒸汽通过发酵罐排气阀。

(6)当控制柜温度接近123，发酵罐内压力接近0.12Mpa时，慢慢打开接种管末端，待接种管内冷凝水排出后，确保末端有少量蒸汽冒出，保证蒸汽循环。

(7)当温度达到123，发酵罐压力达到0.12Mpa时，控制柜开始倒计时，屏幕显示温度和倒计时时间。当倒计时时间为0时，控制柜自动报警，此时空气消毒结束。

(8)排空后，关闭发酵罐加热棒，关闭夹套入口过滤阀、发酵罐进料阀、发酵罐接种阀、接种管路末端阀。微开发酵罐排气阀、夹套排气阀、发酵罐进气阀尾阀，使夹套和发酵罐压力缓慢下降。当过滤器压力即将释放时，开启空压机（气泵）），使空气流过过滤器，通过过滤器的空气在进气阀的尾阀处排出发酵罐，将流过过滤器的空气吹在滤芯上30分钟，使吹出的空气没有水分，即可使用。

(二)发酵罐实际消耗

(1)定量加入清水后，打开夹套排气阀和发酵罐排气阀，接通电源，按“杀菌”键进入杀菌状态。

(2)当温度升至100，蒸汽从夹套中冒出时，关闭夹套排气阀，微开发酵罐排气阀。排出罐内冷空气，保证蒸汽循环。

(3)当控制柜显示屏在压力表上显示温度为123，压力为0.12Mpa时，控制柜自动倒计时，可显示发酵罐温度和倒计时时间屏幕上。当倒计时时间为0时，控制柜会自动报警并打开夹具排气阀，发酵罐的排气阀，使夹套和发酵罐的压力缓慢下降（发酵罐的压力不能下降到零）。这时候发酵罐的杀菌就结束了。

注意：开始计时和杀菌即将结束时，需要对发酵罐进行排空，微开接种阀，即可排出少量空气和水，排空时间为3-5每次几分钟。排水的目的是将阀门处的原水排出；二是对阀门管道进行消毒。

定量加水123灭菌40分钟，降温至20，用空压机保持正压，无菌操作方法