1、酒精灯的火焰要高：当酒精灯的火焰不够高时，火焰周围的无菌范围小，不利于无菌操作，容易造成燃烧不完全和接种钩的灭菌，影响接种后的产量。影响酒精灯火焰大小的因素是酒精浓度和灯芯。酒精浓度越高，燃烧越好。最好使用95% 的工业酒精。灯芯的材质太扎实，塞紧了，吸入的酒精就少了，火力也不旺盛。因此，灯芯最好用棉花拧一下，拉出一定的长度。
2、母试管表面及口部应彻底消毒：用作接种物的母试管表面未在无菌环境中保存。因此，接种时应注意试管表面和管口的灭菌。具体做法：将卫生棉条拔出后，放在酒精灯的火焰上转2-3圈，可以有效减少细菌造成的污染。
3. 封堵、播种、接种和棉塞必须在火焰上方或附近：一旦打开棉塞操作母种试管和待接种试管，就不能离开火焰，只能在火焰中小范围火焰周围。绝对无菌。
4、接种钩：接种钩要烧透。接种钩要用较薄的材料，燃烧时会烧成红色。并注意接种钩的燃烧长度。燃烧长度由试管长度决定。在火焰上方重复燃烧3-4 次。
5、接种时不要使用掉在地上的卫生棉条：接种时应将卫生棉条夹在右手手指之间，不要放在手术台上。一旦掉在柜台上，在将其插入之前将其放在火焰上。不要使用掉在地上的卫生棉条。
6、火焰灭菌后冷却接种钩：未冷却的接种犬会把细菌烫死。冷却一般在待接种的无菌试管的上部空间进行，也可以在斜面的顶部进行冷却。
7、消毒酒精要清洗：注意定期更换。
8、操作要到位：动作要轻、灵、快、准，声音尽量小。
9、接种后工作：及时清理，打开门窗，排除接种时酒精燃烧释放的废气。之后关好门窗，用完后打开紫外线灯消毒，以备下次使用。
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