1、原料处理：牛粪粉碎过筛，与水按1：1.2的比例混合，堆放发酵，每天翻动一次，约20天，牛粪粉变成褐色，有正常的香味发酵的草料，在阳光下晒干。晾干备用。未受潮的小麦，浸透透透，取出，适当遮光通风，待表皮干燥时，用细雾喷洒湿润，24小时后即可发芽。当麦芽长到1-2厘米时，就可以使用了。如果有虫蛀的麦粒也可以用，但是虫蛀的麦粒有孔洞，淀粉容易流出来，所以一定要多洗几次，然后倒入石灰水里用pH值8-9，浸泡6小时，再煮20分钟左右，至麦粒无白心，捞出麦粒，用冷水冲洗干净。
2、基本配方：麦粒100公斤（以干品计），牛粪粉30公斤，石膏粉1公斤，碳酸钙1.5公斤。
3、基质混合：将麦粒和牛粪粉按1:0.2的比例混合，同时拌入其他辅料，注意使牛粪全部粘附在麦粒上，并适当喷水。水是不够的。剩下的牛粪粉待用。
4、装瓶操作：小批量生产一般不用标准瓶，而是用酒瓶、葡萄糖玻璃瓶等装瓶杀菌。为降低生产成本，可提供500毫升输液瓶。先在瓶底放一把牛粪粉，厚约11.5厘米，然后装满麦粒。装瓶时，将瓶身轻轻转动，使麦粒达到瓶肩以下1厘米，然后装入牛粪粉12把。粪便粉，用“L”型工具压扁压实，塞入卫生棉条中。
5、灭菌降温：采用高压灭菌法，在0.15MPa压力下保持22.5小时。灭菌完毕，压力降为零后，即可取出瓶子，移入冷藏室或接种室。提前3天打扫房间，喷10000000000000000000000000000000000000000000000000000溶液。
6、接种操作：室内喷洒Cybexa溶液一次后，用75%酒精擦洗原种子一次，打开接种净化器，10分钟后开始接种操作。每瓶（500ml）原种可收40多瓶。
7、菌种培养：培养室（棚）提前打扫干净，地面浇透水，地毯喷洒百病药液。密封2天后，地面撒上石灰粉，即可将接种的菌种转入。发芽期尽量控制培养室温度在25左右，不要超过28，并且水温空调最低温度可降至22左右。一般养殖户没有条件，可采用土法降温：菌棚内地面用砖块砌高20厘米，铺上新塑料薄膜，将菌瓶垂直沥干，倒入注入地下水，每天换水。 2次，菌瓶可保持在25以下。每隔3天左右喷药预防；发现蘑菇蚊成虫，立即喷洒高效氯氰菊酯将其杀死。
8、清杂处理：接种后第3天开始检查清杂。如发现不是双孢蘑菇菌丝体的菌瓶，应立即从外面清除。如果有脉孢霉菌污染，用方便袋从上到下盖住菌瓶，慢慢移出。对于一般杂菌的污染，可在喷药后倒出物料，晾干后再用；对于脉孢霉菌的污染，应将物料倒出培养室，焚烧或深埋。烫死，用前洗净。
9、暂存：约3545天，菌种充分发芽，暂时不用的菌种应低温保存，一般为24。
10、质量检验：双孢蘑菇的菌丝白色粗大、清晰、有活力，呈扇形。菌丝旺盛且一致；无浓密的黄白色菌丝体；菌丝体粗壮，白色而结实，遇高温呈淡黄色，可出现少量束状菌丝体，上下均匀。
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