绣球菌栽培：母种制备工艺

母种是指经规范育种后获得的具有牢固菌丝体的纯培养物及其继代培养物。玻璃试管作为培养容器和使用单位，通常称为一级种或试管。种类。

关于绣球原母种的来源，有条件的可从子实体中提取，但由于生产工艺要求严格、难度大，一般生产单位均从国家认可的科研单位采购.买回去后，可以直接繁育母种。首先我们来看看母种培养基的制作情况。

母种培养基的制备

配制母种培养基的配方为：复合糖蛋白30克、蛋白胨1克、大豆粉1克、KH2PO4（磷酸二氢钾）1克、琼脂粉20克、水1000毫升。以上材料准备好后，就可以制作了。

将准备好的培养基配方一一倒入锅中，不要先放入琼脂粉，边加热边搅拌，等沸腾后再加入琼脂粉，一直搅拌至琼脂粉完全融化，再放入将煮沸的培养基倒入塑料杯中。这时需要注意的是，如果体积小于1000毫升，就要加水补足。

试管灌装

整理好后，趁热将培养基倒入固定在铁架上的漏斗中，用量筒量取10ml蒸馏水，倒入空试管中，用于分装试管对比。将漏斗软管下端的玻璃管插入试管口约3厘米深，右手挤压胶管止水夹，让培养基缓缓流入倒空试管直至液面与蒸馏水齐平。然后松开止水夹，使介质停止流动，将管子向下移出软管。接下来，按顺序重复，直到所有介质都填充到试管中。分配试管时应注意动作要迅速连贯，防止漏斗中培养基凝固。等分完成后，每个管用硅胶塞住。下一步是捆绑试管。

试管敷料

一般情况下，每7支试管为一捆，试管下端用橡皮筋扎紧，然后用牛皮纸包好试管口，橡皮筋用用于诱捕。下一步是消毒。

介质灭菌

将包裹好的培养基试管垂直放入灭菌架中，再将灭菌架放入灭菌锅中，120摄氏度高温灭菌30分钟。当灭菌器温度降至60摄氏度左右时，及时取出试管，置于斜面上。

放置斜面

斜坡的长度应为试管长度的1/2-2/3。待试管内的培养基完全凝固后，方可将试管收起。配制好的母培养基应存放在阴凉、通风、干燥处。留着以后用。上述工作完成后，必须进行母种接种。

原种接种

转移过程

母种接种是将菌种插入试管斜面的过程。在完全无菌的接种箱、接种室或超净工作台内进行。首先，将准备好的母种培养基、待转移的母种、酒精灯、打火机、接种钩、酒精棉球等放在超净工作台上，打开紫外线灯，消毒30分钟低速通风环境，然后关闭紫外线灯，将风速调到中速，通风5分钟，然后打开荧光灯。

接种时，先点亮酒精灯，用酒精棉球擦拭消毒双手，消毒完毕，左手托住亲本试管和斜面培养基。注意倾斜要向上，同时保持它们处于水平位置。右手握住接种钩，在外焰上反复灼烧，直至接种钩前端变红。接着，拔掉两支试管的胶塞，将烧焦的接种钩插入母试管1中。将母种表面菌丝连同培养基挖出少许，送至母试管1的中部。待连接试管的斜面。拔出接种钩后，烧掉管口，然后塞上橡皮塞。当所有的试管都转移完毕后，就可以进行培养了。

滋养

首先将试管重新捆扎好，记录接种时间，将接种后的试管置于25摄氏度恒温培养箱中，培养约15天。

菌种质量检测

正常母种菌丝呈白色、粗壮、致密、均匀、蓬松、生长整齐、菌落舒展、边缘整齐、无色素、无肉眼可见的污染物。均匀分布在试管的斜壁上。反之，菌丝体呈白色、无光泽、稀疏、生长不规则、菌落皱缩、边缘不规则、黄色分泌物、培养基有污渍和沉淀、肉眼可见的污染物、试管有裂纹等劣种。