接种前必须将灭菌后的塑料袋冷却至25左右。一般塑料袋灭菌后次日即可接种，夏季最好不要超过3天，冬季最好不要超过5天。否则，不仅培养基容易失水，而且污染率高。接种的关键是严格无菌操作，正确掌握熟练的接种技术，动作准确迅速。接种前必须做好两项准备：一是选择合格菌种，菌龄不得超过2月龄。如果菌株瓶中长出小原基菌株，只要时间短，原基没有腐烂变色，还是可以使用的。接种时可弃去原碱基。长出子实体和菌盖已开伞的菌种，因担子孢子已被喷出，菌种纯度下降，不能使用。二是接种前消毒，去除物品表面的致病菌。常用的消毒剂有以下几种： (1)甲醛(Formalin HCHO)：一种无色气体，极易挥发，具有很强的穿透力，具有强烈的刺激性气味，能刺激人体皮肤和粘膜。 40% 的水溶液称为福尔马林。甲醛在冬季常析出乳白色聚合物。甲醛很容易与蛋白质（包括酶）结合，使蛋白质变性，导致细菌种类和孢子死亡。甲醛或福尔马林是一种强效杀菌剂，常用于接种箱、接种室、培养室、栽培室的熏蒸消毒。甲醛挥发有两种方法：直接加热法和氧化还原反应法。直接加热法是将福尔马林置于容器中，直接在酒精灯上加热蒸发；氧化还原法是甲醛与高锰酸钾反应产生大量热能使甲醛蒸发。 (2)高锰酸钾(KMn04)：深紫色棱柱状结晶，强氧化剂。易溶于水，呈紫红色液体，腐蚀性强。高锰酸钾将酶的-SH基团氧化成S-S基团，使酶失活，导致细菌死亡。是一种高效的消毒剂。 0.1%的高锰酸钾水溶液作用10-30分钟即可杀死微生物的营养物质。 2%-3%溶液的短期作用可导致细菌和孢子死亡。其水溶液暴露在空气中易分解，应配制使用。 (3)漂白粉[主要成分为次氯酸钙Ca(Ocl)2]：白色颗粒粉末，有氯气味，易潮解，易溶于水，不稳定，遇二氧化碳、光、热分解。本品含氯量25%，呈碱性。次氯酸钙加水可分解成次氯酸（HOCl），具有很强的杀菌作用。杀菌的原因是由于分解时释放氧气和初生态氧（O）。 O和Cl2共同作用侵入细胞和细菌蛋白质，使酶氧化，促进细胞和病毒的死亡。新鲜的有效氯极易挥发，无效，需密封保存，防止潮解。通常使用浓度为2%-5%的水溶液。直接喷洒地面，用量为20-40g/m2。 (4)酒精(乙醇CH3CH20H)：无色透明液体，易挥发，有强烈酒精气味，易燃，沸点78.5，与水易混溶。用浓度为70%的乙醇消毒，5分钟即可杀死细胞，真菌孢子30-60分钟即可。乙醇能使蛋白质脱水变性，干扰微生物的新陈代谢，抑制其繁殖。 95%乙醇的杀菌能力反而减弱，因为它接触到细菌后，立即使细菌表面的蛋白质凝固，形成一层保护膜，不易渗入细胞内，所以杀菌能力减弱；而70%的酒精可以渗透到细菌的细胞内，起到解菌的作用。蛋白质表面的水膜引起代谢紊乱，使其失去活性，因此具有很强的杀菌作用。 700毫升95%的酒精加入250毫升的水，调成950毫升的70%酒精。 70%的酒精常用于手部消毒和橡胶手套等产品的消毒。 (5)石炭酸(苯酚C6H50H)：苯酚在低温下为无色或白色针状、块状或三角形晶体，有特殊气味和腐蚀性气味。在空气中易氧化变红，熔点42-43。 65以上可与水自由混合。石炭酸能杀死微生物的营养体。在高浓度时，它能裂开并穿透细胞壁，使细菌蛋白凝固沉淀；在低浓度下，它可以使细胞的主要酶系统失活。一般使用5%的苯酚水溶液作为消毒剂。使用热水时，先将其溶解，然后添加所需的量。 (6)Lysol(甲酚皂液C6H4OHCH3)：黄棕色至红棕色粘稠液体，有酚类气味，甲酚含量48%-52%。
Lysol的杀菌力是石炭酸的4倍，杀菌机理与石炭酸相同。 1%-2%来苏尔溶液可用于皮肤浸泡（2min），2%-3%可用于喷雾消毒。常与溴洁尔明、石炭酸交叉使用，用于接种箱、无菌室、培养室的消毒。 (7)布罗杰明(十二烷基二甲基苄基溴化铵C2lH38NBr)：淡黄色胶体，阳离子表面活性杀菌剂，多作用于细菌表面，通过正负电荷结合破坏细菌外膜结构，改变细菌的通透性细胞壁，导致细菌膨胀和死亡。对非芽孢病原体和霉菌有很强的杀菌作用，是石炭酸的几十倍。消毒的特点是快速、彻底、高效。 brogeramine的浓度为5%。使用时可稀释20倍，即0.25%。一般用于接种箱、玻璃器皿表面的消毒。不适用于橡胶手套的消毒。对皮肤和粘膜有轻微刺激。配制后可存放1小时。月，当溶液明显呈黄色或产生较多沉淀时，应弃去。 (8)硫磺：淡黄色结晶或粉末，易燃，发蓝光，产生二氧化硫，对杂菌有很强的杀菌能力，若空气湿度增加，二氧化硫与水结合生成亚硫酸，能显着增强杀菌作用。常用于熏蒸接种室、培养室。每立方米空间使用15g左右为宜。对于养殖室或环境卫生较差的养殖室，采用硫磺熏蒸是经济有效的。
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