蛹虫草菌种分离

(1)皮料选择选用生长正常、健壮、无病虫害的新鲜蛹虫草作为分离材料。野生早熟（8月底前出土）分离出的蛹虫草具有明显的早熟性（即出草早）。细菌菌株可以通过泡沫分离或组织分离来分离。在生产中，组织分离常用于获得纯菌株或复壮菌株。

(2)消毒将新鲜北虫草用清水洗净，去除表土，再用0.1%汞升水溶液消毒13分钟，再用无菌水漂洗数次，再用75%酒精浸泡3 5分钟，用无菌水冲洗后，隔离。

(3)分离首先用手术刀将虫体外侧切开，避开肠道，切出内部白色组织块或子座内的组织块，接种于斜面母种培养基上.菌种最好取自具有龟纹的蛹虫草子实体的顶部组织。

(4)抗菌培养基的选择分离培养基最好使用含50mg/L链霉素的增菌培养基。如果使用其他介质进行分离，在介质中加入一定量的抗菌剂会提高分离效果。常用抗菌剂的用量及添加方法如下：链霉素30-50mg/L，灭菌后冷却至45时添加；氯霉素20-30mg/L，灭菌后冷却至45时加入；青霉素20mg/L，灭菌后冷却至45时加入；牛胆5 g/L，制备时加入；孟加拉红35 mg/L，在培养基沸腾时加入。

(5)培养分离接种后，在20培养箱中培养10天左右，选择性状良好的亲本作为菌株。

(6) 优良菌株的鉴定标准是：菌丝体白色，粗壮致密，紧贴培养基呈匍匐状生长，边缘整齐，无明显蓬松的白色气生菌丝，后期分泌黄色素，菌丝体在光照后会发生变化。它是橙色的。将分离菌株扩大培养后，接种到水稻培养基上进行除草鉴定。 18-20培养20-30天，如无污染，继续培养，1个月后可形成橙红色子实体。经过品种鉴定，选择性状优良的菌株进行生产。

培养基

以大米、玉米等为主要原料，加入10%-25%的蚕蛹粉或奶粉，可提高蛹虫草子实体的品质。将堆肥与营养液按1：1的比例混合，pH值保持在5.5-7.0。照常装瓶、消毒和接种。

菌丝体培养

接种后的料瓶应放置在清洁、避光的环境中培养，空气湿度应保持在60%。初期，为减少杂菌的污染，室内温室应保持在15-18之间。物料表面铺满虫草菌丝后，应将温度升至20-23，持续15天左右，菌丝即熟透堆肥，完成营养生长。