灵芝母种的制作

母种是灵芝的纯菌丝体，通过孢子或组织的分离培养得到保存，并经栽培试验鉴定。具有优良的经济性能，在试管品种中比较稳定。

一般情况下，智农可以从科研机构或菌种保藏机构引进灵芝母种，技术实力雄厚的生产单位也可以通过组织分离的方式制备灵芝母种。

(1) 培养基制备

(1) 培养基配方

1.掌上电脑媒体

土豆（去皮）200克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000毫升。

2、马铃薯综合培养基

土豆（去皮）200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0.5克，琼脂20克，水1000毫升。

3、马铃薯麦麸综合培养基

土豆200克（去皮）、麦麸100克、葡萄糖20克、磷酸二氢钾2克、硫酸镁0.5克、琼脂20克、水1000毫升。

4、马铃薯酵母粉综合培养基

土豆200克，葡萄糖20克，酵母粉4克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0.5克，琼脂20克，水1000毫升。

(2)培养基生产步骤

选材—准确称量—提取—制备定量—分装—调节PH值—灭菌（121，30分钟）—斜面放置（培养基长度为试管长度的2/3） ).

(3) PDA培养基制备方法

称取去皮切片的土豆200克，放入锅中，加水1000毫升，煮至薯片软而不烂。用4-6层纱布过滤，取滤液。滤液加琼脂20克，继续煮至琼脂完全融化，加葡萄糖20克，加水至1000毫升。趁热分装到试管中，加至试管长度的1/5-1/4处，擦净管口，用棉塞或硅橡胶塞塞住。卫生棉条的大小要规范，松紧适中，不能有缝隙。然后，在0.11MPa、121下灭菌30分钟。

灭菌后，将试管斜放于斜面上，使培养基前端铺至试管长度的1/2处，盖上纱布或灭菌报纸（防止过量凝），待培养基凝固（静置24小时），最后取3-5支试管，置于30培养3天。若无细菌出现，则表明灭菌完毕，可用于接种。

(2)菌株的分离培养

(一)菌种选择

生产上一般选用6-7个无病虫害的成熟鲜菇为种菇。芝麻表面可用紫外线消毒，用酒精擦拭。

(2) 组织分离

组织分离前，用酒精棉球擦拭蘑菇表面，然后撕下蘑菇帽，一分为二。一般选择灵芝菌盖黄白色生长区的真菌组织或灵芝菌柄上方菌盖中部的真菌组织作为播种点。分离组织时，用无菌手术刀小心切开灵芝肉，然后用接种针取5mm5mm的小块菌肉组织，插入试管培养基上表面。

(3) 培育

上述分离株均在生化培养箱中培养。

调温至28-30，避光培养。 2-3天后，菌肉组织即可开始萌发，出现肉眼可见的菌丝体，并逐渐铺展在培养基表面。一般7-10天即可装满试管坡度。如果2天内分离物（肉组织）出现肉眼可见的菌丝，那就麻烦了。如果分离物（肉组织）培养4天后仍有肉眼可见的菌丝体，可能是切割灵芝组织的手术刀或接种针在酒精火焰上灼烧后未充分冷却，或其他原因造成分离物质（肉组织）失去活性，不能使菌丝发芽。

灵芝菌丝体白色、细长、扁平、致密、均匀。随着菌丝的生长和菌落的扩大，接种块处的菌丝逐渐老化，形成坚韧的菌皮，随着菌皮的老化，颜色逐渐发生变化。它是淡黄色的。

（四）质量要求

选用生长整齐、生长速度正常、菌丝外观丰满、生长旺盛、分离株白色、细长、扁平、致密、均匀的灵芝菌丝作为备用菌种。

（三）母种生产过程中的注意事项

(1) 指定合适的菌种生产方案。母种在试管装满后可在冰箱中保存一段时间，但要求原种和栽培种在瓶（袋）装满后尽快用于生产。

(2)无论是组织分离获得的菌株还是外购的菌株，都必须进行培养试验，符合生产要求的菌株才能用于规模化生产。菌种选择不当会给生产造成不可估量的损失。

(3)组织分离和菌种试管转移，必须严格执行无菌操作的相关要求。

(4)尽量避免多次转管。转移过程中可能会发生基因突变，使菌株发生降解，缩短菌株的寿命。通常，灵芝母种转3-4次后，需重新分选复壮，重新进行栽培试验，以扬劣留优。