菌种冷冻干燥保藏法

1.准备安瓶管。用于保存冻干菌种的安瓿管应采用中性玻璃制成。形状可为长颈球底，又称泪滴形安瓶管（图VII-15），尺寸要求外径为6-7。5mm，长度105mm，球径9-11mm，壁厚0.6-1.2mm。也可以使用没有灯泡的管状安瓿。插入棉塞，1.05kg/cm2，121.3灭菌30分钟，备用。 2. 准备菌种。冷冻干燥保存的菌种可保存数年至十年以上。为避免多年后出错，应特别注意所用菌种的纯度，即不能有杂质。细菌污染，然后在最适温度下在最适培养基中培养，以产生良好的培养物。细菌和酵母的年龄要求超过对数生长期。如果使用对数生长期的菌株进行保存，反而会降低存活率。一般来说，细菌需要培养24-48小时；酵母需培养3天；形成孢子的微生物应该保存孢子；放线菌和丝状真菌需要培养7-10天。 3、菌悬液的制备及分装以菌液为例，在菌液斜管中加入约2ml脱脂牛奶制成浓缩菌液，每支安瓶管分装0.2ml。 4、冻干机成套销售，价格昂贵。以下是可以达到相同目的的简单方法和设备。在低温冰箱中冷冻分装安瓿。如果没有低温冰箱，可以使用干冰（固体CO2）酒精或干冰丙酮等制冷剂，温度可达-70。将安瓿管插入冷媒中，冷冻4-5分钟，使悬液凝固。 5、真空干燥为使样品在真空干燥时保持冷冻状态，需准备冷冻罐，罐内放入碎冰块和盐，混合均匀，可降温至-15 C。仪器仪表如图VII-16所示，安瓿管置于冷冻槽中的干燥瓶中。一般在30分钟内能达到93.3Pa（0.7mmHg）的真空度，被干燥物不会熔化，然后继续抽气。数小时内可观察到被干燥物变干，一般抽至26.7Pa（0.2mmHg）的真空度，保压6-8小时。 6、封口抽真空干燥后，取出安瓿管，接上玻璃管封口。用L型五通管继续抽气，约10分钟即可达到26.7Pa（0.2mmHg）。在真空状态下，用煤气灯的细火在安瓶瓶颈中央封口。密封后，存放在冰箱或室温避光处。该方法是保存菌种最有效的方法之一。适用于一般生存力强的微生物及其芽孢和非芽孢菌，甚至适用于一些难以保存的致病菌，如脑膜炎球菌、淋病菌等。等也可以保存。适用于菌种的长期保存，一般可保存数年至十年以上，但设备和操作相对复杂。 （来源：西安食用菌研究网）