食用菌麦粒培养基菌种打孔固定培养技术

在小麦品系的常规生产中，品系瓶中的小麦培养基一般是不固定的。如果装有小麦籽粒培养基的菌株瓶在灭菌、接种和处理过程中不能保持直立，则会损坏小麦籽粒。介质很容易接触卫生棉条并将水分传导至卫生棉条和密封件，从而保持卫生棉条和密封件湿润。受潮的封口纸和棉条极易受到外界细菌的感染，使细菌可以通过封口纸和棉条的阻隔进入菌种瓶污染麦粒培养基，故菌种的细菌污染率为比较高。另一方面，由于接种时菌种只能接种在麦粒培养基表面，菌丝只能自上而下生长，培养时间较长，能量消耗大，不仅增加种子生产的成本，也增加了细菌污染的机会。笔者在小麦胚芽菌株生产实践中探索出一套新的新技术，即固定瓶装麦粒培养基，防止麦粒培养基在侧放时与棉条接触，培养使底座中间开通气接种孔，直达菌瓶底部，同时将菌种接种到通气接种孔底部和麦粒培养基表面。与常规制种方法相比，麦粒培养基固定在种子瓶中后，在灭菌、接种和搬运过程中将种子瓶侧放时，种子瓶中的培养基不会移动，培养基和棉塞不能相互接触，防止介质中的水分通过接触传递到卫生棉条上，使卫生棉条和封口纸始终保持干燥。由于细菌孢子不可能在干燥的封口纸上发芽，所以卫生棉条和封口纸可以起到阻隔空气中细菌孢子的作用，有效防止介质被细菌污染，细菌的小麦籽粒品种。利率从3% 以上下降到0.2% 左右。培养基中间有通气接种孔，使菌体同时接种在培养基的底部和上部，并在培养基的上下层萌发和生长。既可省去旧制种方法中摇动培养基分散菌种培养菌种的工作，又达到缩短培养时间和降低能耗的目的，缩短了菌种的培养时间。温室内的菌种减少了约1/3，节省了温室栽培过程中近1/3的能源消耗。现将食用菌麦粒培养基通风-接种孔固定培养技术介绍如下： 一、麦粒培养基的制备1、麦粒培养基配方：99%小麦粒，1%碳酸钙。 2、麦粒培养基的制作与装瓶：将麦粒洗净，用水浸泡12小时，再煮沸15分钟，取出，摊开晾干，加入碳酸钙，放入在应变瓶中。将其填充到瓶肩下方1.5-2 厘米处。二、麦粒培养基的固定打孔1、固定材料的准备。固定材料采用锯末培养基，其配方为：阔叶木片78%，麦麸20%，蔗糖和石膏粉各1%，水适量。将原料按比例混合均匀，加水量以用手紧握木屑培养基时，指间有水渗出但不滴落为宜。 2、麦粒培养基的固定方法在菌株瓶的麦粒培养基上填满木屑培养基，然后用扁铁钩压实平整。木屑培养基的用量要压实、弄平，刚好能到种子瓶的肩部。 3、在麦粒培养基上打通气接种孔用直径1.2-1.5的尖头圆木棒，从培养基表面中间到瓶底打通气接种孔。打孔需要重复多次才能打孔。第一次打孔后，将少量木屑培养基放入瓶中，边打孔边用打孔棒拨入孔内。每次打孔后退出木棒时，旋转时向后移动，以免松动孔壁上的培养基。如此重复3-4次，直到介质中间形成由木屑介质制成的实心孔壁。最后用扁铁钩微调培养基表面的压力。 4、菌瓶的清洗和密封将菌瓶口斜向下放入清水中，清洗瓶外壁上附着的木屑培养基和培养基上方的瓶内壁。待瓶口干燥后，在瓶口放上卫生棉条，并用牛皮纸包住瓶口。 3、培养基灭菌将瓶装麦粒培养基放入高压蒸汽灭菌器中灭菌，压力1.5Kg/cm2，温度121-126灭菌2小时。 4、接种培养在接种箱内接种。接种时，将花生粒至蚕豆粒的种子块挖出，分别接种于通气接种孔底部和培养基表面。

接种后置于温室内27恒温培养。 15-18天后，菌丝体可覆盖整瓶。五、适用范围本方法适用于瓶装食用菌柱头的制种。由于塑料袋外壁柔软，固定的麦粒培养基在灭菌、接种和搬运过程中容易因碰撞、挤压而变形，难以保持固定状态，因此该方法不适用于种子生产。