不同灵芝菌株富硒能力的比较研究

硒是人体必需的微量元素，是GPx（谷胱甘肽过氧化物酶）家族、ID（脱碘酶）家族、硒蛋白P、硒蛋白w的重要组成部分，在人体内发挥着重要的生理功能。现已证明，克山病、大骨节病、癌症、肿瘤、免疫力下降、心脑血管疾病、糖尿病、不孕不育、艾滋病、白内障等多种疾病都与体内缺硒有关。硒不能在人体内合成，必须从外界摄取。”研究表明，无机硒（如硒酸盐、亚硒酸盐）有毒，其使用范围和用量受到限制；有机硒化合物无毒或低毒、生物利用度高，因此，有机硒已成为人体补硒的首选。”灵芝是我国中医药和传统食疗宝库中的瑰宝。具有广泛的药理活性。有机硒具有优越的安全性、生理活性和吸收率，对发挥硒与灵芝固有的协同生理作用具有重要意义。该研究对15种灵芝的富硒能力进行了有针对性的比较试验，筛选出富硒能力强的菌株，为富硒灵芝的栽培和液体发酵生产提供参考。 1 材料与方法1.1 灵芝菌株泰山灵芝（1号）、韩国灵芝（2号）、新洲灵芝（3号）、G6（4号）、日本赤灵芝（5号）、日本平氏灵芝(6号),美味灵芝(7号),精大灵芝(8号),天芝(9号),G—F,(10号),(;902(11号), G3（12号）、惠州灵芝（13号）、G8（14号）、G11（15号）引自山东金祥食用菌研究所、华中农业大学、江苏省食用菌菌种保藏中心中心等1.2 供试培养基PDA均质培养基：马铃薯汁20%，葡萄糖2v//，K:HP0.0.1%，硫酸镁0.05%，琼脂2%，加水l 000mL。 种子培养基：马铃薯提取物20~ A, 葡萄糖2%, 蛋白胨1%, 酵母提取物1%, 磷酸二氢钾(K: HPO.) 0.1%, 硫酸镁0.05%, VB. 10 mg/kg, pH 7.0, 水1 000 mL. 液体发酵培养基：2%蔗糖，2%玉米粉，2%豆饼粉，0.1%磷酸二氢钾（KH：P0.），0.05%硫酸镁，VB，10 mg/kg，pH 70，水l 000 mL。 1.3 试验方法1_3.1 PDA平板培养基耐硒试验将不同的灵芝菌株接种在Na~-SeC)中，浓度分别为0%、O. 05%、O. 2%、O. 5% PDA平板上培养基，28避光培养。菌丝萌发后，每天观察测定菌丝的生长情况和生长速度。 1 3.2液体摇瓶培养灵芝富硒能力对比试验将灵芝菌株接种于种子培养液中，28，转速140r/min旋转摇床，封闭培养7天。接种含亚硒酸钠浓度为O%、O%的5%种子液的接种物。 05%、0.20/i、0.5%发酵培养基，28，转速140r/min旋转摇床，培养7天，测定富硒灵芝菌丝体中硒的含量。 1.3 3 分析方法1.3.3.1 生物量采用干重法测定。将发酵液以4 000 r/rain离心15 min，去除上清液。在60C 的烘箱中干燥24 小时。 1.3_3.2硒含量的测定样品处理取干燥至恒重的菌丝体O.1g，加10mL 95%浓硫酸，试样湿润后，加20mL混酸溶液，加热控温.在300左右保持30分钟左右，使溶液无色。取出并冷却至50 mL。硒的测定：样品经混酸消解后与DAN在酸性溶液（pH 1~2）中反应生成4,5-苯并大头菜硒，与环己烷和硒一起取出，荧光分光光度法在仪表上测定，在激发波长376nm，发射波长520nm下测定硒的荧光强度（参照GB1 3015-19）。总富硒量（g，L）菌丝体生物量（g，L）菌丝体硒含量（LLg/g） 2 结果与分析2.1 不同灵芝品系含Na。二氧化硫。在PDA 平板培养基上的生长结果如图1 所示。

从下图1可以看出，菌丝在不含亚硒酸钠的培养基上的生长速度明显高于含亚硒酸钠的培养基，在500-5 000 mg/kg范围内，不同浓度的亚硒酸钠对灵芝菌丝体的生长有不同程度的抑制作用，且这种抑制作用随着亚硒酸钠浓度的增加而增强，且亚硒酸钠浓度越高，灵芝菌丝体的生长速度越慢。 13号、14号和7号菌株生长较快，尤其是13号（惠州赤芝品种）在含亚硒酸钠的PDA培养基上生长速度最快，分别为0.79 cm/d、0.66 cm /d和0.58 m/d，通过实验发现惠州一枝菌丝在含亚硒酸钠的培养基上发芽时间较早，菌丝较粗。因此，可以认为其对亚硒酸钠的耐受性优于其他灵芝菌株。 2_2不同菌株在液体培养过程中富硒能力的比较由图2H可见，在灵芝液体培养基中加入100mg/kg、300mg/kg、500mg/kg的亚硒酸钠，以不添加硒的硒酸钠液体培养基作为对照，试验结果表明，添加100-500mg/kg亚硒酸钠后，菌丝体生物产量低于对照菌丝体，且亚硒酸钠浓度越高，生物产量如图3所示。可见，在灵芝液体培养基中加入100、300、500mg/kg的亚硒酸钠进行培养，取液体培养基不添加亚硒酸钠作为对照，添加相同浓度亚硒酸钠后，8号、10号和14号有机硒含量分别为3.784.2桶g/100mL和3162.5桶g/100mL。综上所述，可以看出，在相同条件下，惠州赤芝13号菌株对亚硒酸钠的耐受性优于其他灵芝菌株。在液体培养中，其菌丝体生长最好，富含硒元素。能力是最强的。在100 mL液体培养基中加入300 mg/kg亚硒酸钠培养后，最终菌丝体中有机硒含量约为3 784.2 g。 3 讨论灵芝富硒栽培

养目前是灵芝研究的一个热点，目前一般通过两种方法制备富硒灵芝。一是人工栽培生产富硒灵芝子实体，二是液体发酵生产富硒灵芝菌丝体。两种方法均通过在培养基中添加亚硒酸钠，利用灵芝自身的生长代谢过程来将无机硒转化为有机硒，并自然地达到一定程度的生物富集”。在研究中发现，灵芝对硒有一定的耐受性，而且富集的硒的浓度在一定范围内，随培养基中的亚硒酸钠浓度增加而增加，但得到的产量却有可能受到影响。在灵芝富硒的过程中，应综合考虑产量、富硒水平、人体的每日需要量和产品的量越低。在供试灵芝菌株中，7号菌株和13号菌株的生物产量较高，在添加300 mg／kg的亚硒酸钠后发酵最后其生物量分别达到1.478 g／100 mL和1.586 g，100 mL。因此，可以认为在相同条件下，亚硒酸钠对7号和13号菌株液体培养时生物量的比其它菌株的影响小。号菌株液体培养后菌丝体中有机硒的含量较高，其中尤以13号菌株最高，在添加300 mg／kg和500 mg／kg亚硒酸钠时，其菌丝体有机硒含量分别达到2：386斗g／g和2 618g／g，经计算总最终定位等方面的因素，以求硒的转化更经济有效。研究比较了不同灵芝富硒能力的差异，为灵芝的富硒栽培和液体富硒发酵生产作了有意义的尝试准备工作。灵芝富硒的能力与硒的浓度、培养的配方组成、液体发酵时的温度、pH值、溶氧参数等息息相关，这些参数对硒的转化率的影响有待于进一步的深入研究。