液体菌种制作技术

1、设备问题国内生产液体应变设备的厂家很多，有的可操作性高，有的可操作性差。通常，技术不熟练的用户很容易失败。根据我们多年液体菌种指导经验，一套好的设备必须有良好的空气过滤系统、灵敏的温控系统、快速冷却系统、断电保护装置、高压整理坦克。空气过滤系统应由粗滤器、气泵、总滤器和3-4个精滤器组成。 3~4级过滤器应能耐高温高压，易于灭菌。呼吸器还设计用于承受高温和高压。温度控制系统必须有温度控制仪表和传感器，以及配套的电热管或气源。降温装置应迅速降温，进入下一阶段时温度降至28以下。 2、培养基问题2.1 食用菌培养基中养分浓度和养分浓度比例合适时，才能很好地管理食用菌的生长。养分浓度过低，不能满足食用菌正常生长的需要；如果营养物质浓度过高，不仅会造成浪费，而且会因渗透压过高而抑制或杀死食用菌的生长。同样，培养基中各种营养物质的比例关系是影响菌丝体生长繁殖、代谢产物形成和积累的重要因素。在各种养分的比例中，最重要的是碳源和氮源的比例。即碳氮比，如果碳源不足，细菌容易老化自溶；氮源不足，菌丝生长过慢，但碳氮比过小，食用菌又容易因氮源过多而过度生长，不利于代谢产物的代谢。积累。 2.2 必须有合适的碳源和氮源。需要根据菌种调整合适的pH值，并有合适的粘度。不同菌株对碳源的需求和利用不同，但大多数药用真菌都能利用葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和淀粉。例如，香菇最好的碳源是蔗糖和红薯淀粉。最好的氮源是酵母膏、豆饼粉，其次是蛋白胨。香菇生长期最好的氮源是复合氮源。配比为：豆饼粉：酵母膏：蛋白胨=1：1.5：0.2。 2.3 不同菌株的适宜pH范围不同。通常，调节PH值有以下几种方法： 准备合适的培养基，将培养物的初始pH值调整到合适的范围内，使其具有良好的缓冲能力。 酸碱调节剂如Caco2，或在培养过程中在非营养基质中加入氨水或生理酸性物质。 PH控制与代谢调节相结合，通过饲养控制PH。 2.4 培养基粘度越大，菌球越小，菌毛越短。但粘度不宜过大。在培养过程中，接种量越大，菌丝球越小。当接种量大时，通常可以分散生长，而接种量小则有利于菌丝球的形成。搅拌速度快、风量大时，菌球小；搅拌速度慢、风量小时，菌球直径大。 3、液体菌种的生长繁殖规律食用菌液体菌种的生长分为四个阶段，即滞后期、指数生长期、稳定期和衰退期。 3.1 滞后期。其特点是生长速率常数等于零，细胞体积增长较快，细胞内储存物质逐渐消耗，DNA和RNA含量相应增加，分裂缓慢，新陈代谢活跃。在此期间，细胞在生理上和物质上为下一阶段的快速生长和繁殖做准备。滞后期的长度随菌株、年龄和培养条件而变化。 接种龄，即接种物的生长期，处于生长期的哪个阶段。当菌株处于指数生长期时，后代培养材料的滞后期较短。处于滞后或垂死阶段的后代培养物具有长期滞后阶段。稳定生长期培养的滞后期介于上述两者之间。 接种量，接种量的大小可显着影响滞后期的长短，接种量越大，滞后期越短。 培养基成分富营养滞后期短，反之则滞后期短。 3.2 指数生长期。将液体摇瓶种子引入发酵罐中适应一段时间，即进入指数生长期。这一时期的特点：生长速度最大，一次细胞分裂所需的世代时间（G）较短，细菌的大小、形状和生理特性比较一致，酶系统活跃，新陈代谢快生机勃勃，活菌数接近细菌总数。 3.3 稳定期。

随着细胞的不断生长繁殖，培养基中的营养物质逐渐消耗，形成代谢产物，使细胞的生长速度逐渐降低。此时细胞的生长速率等于死亡率，即生长速率常数为零。细胞总数达到最高点。这称为稳定生长期。这一时期的特点是：活菌数稳定，细菌总数达到最高水平，代谢产物的合成和积累为主，代谢积累达到最高值。 3.4 下降期。对于已经达到稳定生长期的菌群，由于营养不足，种群内的细胞死亡率逐渐升高，以致死菌数超过新菌数，活菌数增加。人口减少，呈现“负增长”曲线。此期特点：菌体形态、大小异常，甚至变形，菌体自溶。