PDA培养基的制作方法

马铃薯葡萄糖琼脂培养基是最常用的培养基，简称PDA，主要用于真菌的分离培养，有时也用于植物病原菌的培养。 PDA培养基（马铃薯葡萄糖培养基）配方：去皮马铃薯200g葡萄糖20g琼脂15-20g蒸馏水1000ml自然pH值。在PDA培养基配方中，也可以用蔗糖代替葡萄糖，这样配制的培养基也称为PSA培养基。 (1)称重。称取去皮土豆200g、葡萄糖20g、琼脂15-20g。温馨提示：琼脂的添加量视琼脂的质量而定，质量好的15g就够了，质量差的要适当增加。此外，夏季气温高时，应适当增加用量。 (2)将土豆切成小块，放入锅中，加入1000毫升水，煮20~30分钟。用纱布过滤马铃薯残渣。 (3)将马铃薯滤液放回锅中，加入琼脂，加热溶化。小贴士：琼脂融化过程中，需要用玻璃棒不断搅拌，火力要控制好，不要让培养基溢出或烧焦。 (4) 添加葡萄糖。待葡萄糖溶解后，加入适量的水补充加热时损失的水分，定容至1000ml。小贴士：通常用红蓝铅笔在中号锅中标出不同容积的刻度，如1000ml、2000ml等，当容积恒定时，直接加水至标出的刻度。 (5) 包装。根据实验目的不同，配制的培养基可分为试管或锥形瓶。分装试管，数量为管高的1/5，灭菌后做斜坡。装三角瓶的容量以不超过三角瓶体积的一半为宜。 (6) 塞子。将棉塞塞在管子或瓶子的口上。棉塞应选用未脱脂松散的棉花制成。棉塞可以过滤空气，防止细菌侵入，减缓介质水分的蒸发，因此被广泛用于植物病理学研究。正确的卫生棉条是完全适合管口或瓶口的形状、大小和松紧度。太紧会阻碍空气流通，操作不便；如果太松，达不到过滤细菌的目的，如果卫生棉条太小，又容易掉入试管中。里面。正确的卫生棉条头要大一些，大约1/3在外面，2/3在试管里面。包装过程中注意不要污染管（瓶）口的培养基，以免浸湿棉塞造成污染。如果不用棉塞，也可以用橡皮塞或专用的金属或塑料试管盖。为使空气进出自由，橡皮塞不宜太紧，灭菌前应在管口夹一根纱线。 (7) 包扎。塞好后，用绳子系好试管，然后在卫生棉条外面包一层牛皮纸，防止消毒时冷凝水弄湿卫生棉条，然后用绳子系好。用记号笔标明培养基名称、制备日期、组别、生产者等。 (8)灭菌。将上述介质在0.103MPa、121、高压蒸汽下灭菌20-30min。家用高压锅蒸1小时后即可杀菌。 (9) 留出斜面。将灭菌后的试管培养基冷却至50左右（防止斜面凝露过多），将试管口端放在玻璃棒或其他高度合适的器具上，斜面长度不宜过长超过试管总长度的一半为宜。培养基灭菌后须在37培养箱中培养24小时，或室温放置数天无菌即可使用。 PDA培养基一般不需要调节pH值。对于需要调节pH值的介质，一般用pH试纸测定pH值。若介质呈酸性或碱性，可用lmol/L NaOH或lmol/L HCL溶液调节。调整时应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。温馨提示：不要过度调节pH值，以免回调影响培养墓中各离子的浓度。配制低pH值的琼脂培养基时，如果预先调好pH值并在高压蒸汽下灭菌，琼脂会因水解而无法凝固。因此，培养基和琼脂的成分应分别灭菌后再混合，或在中性pH条件下灭菌，然后调节pH值。