银耳菌种的各种分离技术

由于银耳孢子（从银耳子实体中分离出来）没有纤维素酶和半纤维素酶，不能分解纤维素和半纤维素，甚至不能利用硝态氮，水解淀粉的能力差，不能单独使用。在培养基上生长。它的生长发育必须伴随着一种叫做“香灰”的菌类。该菌子囊果为黑色颗粒，在马铃薯、蔗糖等培养基上能产生黑色素，分生孢子呈黄绿色、灰色。由此得名。香灰菌丝体是银耳菌丝体的伴生菌，具有分解木材的能力，能帮助银耳菌丝体获得所需的养分。可见，制作各级银耳菌种时，每一个试管、每一个菌种瓶、每一个种植袋（甚至每一个接种孔）都必须有银耳菌丝体（二元菌丝体，又称白毛）团块或孢子-菌种）和伴随的菌香灰菌丝在培养基（料）中按比例协调生长，培育出具有实用价值的有效菌种，可用于实际种植，这是区别于其他食用菌品种的。为了保证银耳菌种的质量，研究人员首先分别培养了银耳双核菌丝体“白毛球”、酵母样分生孢子“孢子”、香灰菌丝体（又称羽状菌丝体、耳友菌丝体）。 分开存放。只有在制种季节，才能将两种纯菌种组合起来进行混栽，制成母种、原种或栽培种进行各级生产，供各地菌种场或种植户使用。由此可知，研究单位保藏的银耳菌种与生产单位使用的菌种不同。研究中使用的银耳菌种可以说是一种祖先菌种，是社会上所有生产物种的始祖。育种者称它为“原始种”，它是单一品系的纯培养物。这些纯种仅用于育种和研究，一般不对外使用。社会生产中使用的银耳母种、原种和种植种为双菌培养，即银耳菌丝体或孢子与香灰菌丝体（子囊菌）同时接种于培养基中混合培养。此类菌株通常只使用一次。否则，转管时容易人为分离双菌，使培养物中的银耳菌丝逐渐减少，大部分香灰菌丝残留，导致银耳种植失败。下面介绍银耳菌种的分离、制备和贮藏技术： 分离技术：获得银耳菌种的方法主要有担子孢子分离、组织分离和菌种分离。 1. 孢子喷射法这是一种通过从新鲜和成熟的子实体中自动喷射出担子孢子来获得纯菌株的方法。以个大、色白、无病虫害的新鲜银耳为种穗。将银耳用无菌水冲洗几次，然后用无菌纱布或吸水纸吸干银耳表面的水分。因为如果耳片表面有一层薄薄的水，会影响银耳担子孢子的喷出，容易污染上层细菌。然后剪一小块种穗，使其放入三角瓶或试管时不碰到瓶壁或管壁，然后用不锈钢小钩钩住小耳片，挂起来将其迅速放入三角瓶或试管中，同时注意不要让种穗接触培养基表面，防止污染细菌，用棉塞盖上，然后置于20- 25C。 24小时后，从耳片中喷出的担孢子会落在光滑的培养基上。基底表面形成雾状孢子印。此时，在无菌箱或无菌室中，取出悬浮在瓶中的耳片，用棉塞塞住，移至20-25的室内培养。 2-3天后，培养基表面变细。会有许多乳白色、糊状的小菌落。这是银耳的酵母状分生孢子。当培养基上出现酵母样分生孢子菌落时，为防止和减少污染，应尽快进行纯化，即挑取少量不含杂菌的银耳酵母样分生孢子，转移他们到新的试管中进行培养。无论银耳担子孢子还是酵母状分生孢子都不易萌发成菌丝，因此很难直接用于生产，目前已很少使用。但要获得银耳有性繁殖的后代，必须采用担子孢子分离法，萌发成单核菌丝，然后进行配对实验。 2、组织分离法与香菇和平菇不同，银耳组织分离法操作难度大，实际意义不大。

因为耳片一旦糊化，就不容易再长菌丝了。而且，种在木头上或野生的银耳，长期暴露在外界，各种细菌肯定会附着在耳塞上。附着的杂菌不易洗掉，药物表面不易消毒，容易造成银耳和杆状菌一起死去。只有位于树皮和木质部之间的肥大的木耳比较容易分离得到银耳菌的纯菌丝体。但从穗基分离出的纯银耳菌丝往往呈鹅黄色或橙黄色，不是纯白色，而且菌丝生长速度比较慢，效果不理想。 3、真菌分离法利用银耳子实体（简称木耳）的切片进行分离，是目前获得具有实用价值的银耳菌种的最主要方法。真菌分离法的主要技术是消除真菌对真菌的干扰，防止分离时被真菌污染。银耳菌丝和香灰菌丝必须分开。对于初学者来说，分离耳木的方法并不容易掌握，必须反复练习，直到掌握分离要领。木耳分离法的主要步骤如下：在第一、二批银耳长出时，选择穗长、品质最好（特别是宽度和白色）、菌量最少的木耳，并将其用作单独的材料。分离后的物料风干并用熏蒸剂驱除杀虫剂（特别是螨类）后，移入无菌箱或无菌室进行分离。 耳材灭菌将耳材锯成2-4cm厚的木轮，然后剥去树皮和耳基，放入接种箱（室）内，用0.1%汞升水或70%酒精擦拭耳材表面消毒。本领域技术人员也可以在不进行表面灭菌的情况下进行分离。 穗树的播种：将穗树从穗基长出的地方纵向剪成两截。然后，在耳根生长的地方正下方的木头内刮下非常小的木屑粉。或香灰菌丝混合少许银耳菌丝，机会较多），接种于试管内培养基表面。接种后将试管置于20-28室温下培养，数日后接种块周围开始长出菌丝。 分离结果由于分离技术不同，分离结果也不同。大致可得到如下结果：只有银耳菌丝体；只有香灰菌丝体；银耳菌丝体和香灰菌丝体，但银耳菌丝体占绝对多数；银耳酵母样分生孢子和香灰菌丝体。如果有细菌的干扰，分离的结果会比较复杂。为获得有生产价值的银耳菌种，分离后3-7天内每天观察，分别分离银耳菌丝体和香灰菌丝体。银耳菌丝体的特征：白色、黄白色及从白到黄的各种中间色，气生菌丝在培养基表面呈直立、倾斜或扁平状，基生菌丝长在培养基中。菌丝直径l.5

-3微米，有横隔膜，有明显的（但不是每个横隔膜上都有）锁状联合，生长速度比一般蘑菇缓慢。在某些情况下，在培养基表面会出现缠结的菌丝团，并逐渐胶质化，变成小原基，长出小耳片。当双核菌丝开始胶质化时，在菌丝顶端可以发现有若干担子样的膨大细胞，这意味着双核菌丝已进入结实阶段。双核菌丝继代（移植）后或继续长出新的菌丝，或迅速胶质化，长出耳片，也可以变成粘糊糊的酵母状分生孢子（取决于菌株的菌龄、发育程度、培养基表面的水层，接种针热或冷，接种时手势轻或重等刺激）.由双核菌丝断裂成的"酵母状分生孢子"在适宜条件下变成银耳菌丝。　　香灰菌丝的特征： 菌丝初无色，大量生长时白色，羽毛状， 常有特别细长的主干和侧生的略呈"羽毛状"的分枝，老菌丝变淡黄色，淡棕色，培养基逐渐由淡褐色变为黑色或黑带绿色。培养基表面的气生菌丝灰白色，细绒状，有时有碳渍的黑疤，分生孢子梗近扫帚状，分生孢子少见。若用木屑培养基，破瓶后可发生黄绿色至草绿色的近椭圆形的分生孢子。在段木表面可以产生扁平黑色的子座。已知香灰菌可能不是单一个物种，可能隶属于碳团属和碳豆属。有3-4种，其中有一种经鉴定初步认为是阿切尔碳团（Hypoxylon archeri）。