防止菌种退化的方法

环境因素，尤其是营养物质，会影响真菌异核体的比例和异核体的分解。此外，不利的环境因素会导致有害物质的积累，使细菌中毒。因此，为防止异核体的分解和同核体的形成及有害物质的产生，必须选择合适的贮藏和培养条件。 1、适宜的储存条件：恒温、低温（2-4）储存，（每六个月激活一次，储存时间尽量缩短至不超过一年）； 在保存液中加入0.5%的琼脂（防止培养基中水分大量分布，延长保存时间）； 用无菌胶塞代替棉塞（可防止细菌污染和减少与试管外空气的接触，避免斜面干燥，减少营养物质的消耗）。 贮存期满，应及时转移至试管内，或采用其他方法继续贮存，否则细菌极易严重降解，造成严重损失。 2、适宜的培养条件液体培养的最佳培养基：较好的碳源有麦芽糖、葡萄糖、玉米糁、红糖、甘油、蔗糖等，浓度范围为2%5%；较好的氮源有蛋白胨、大豆粉、硝酸铵、蚕蛹、奶粉、酵母膏，浓度范围为0.11%0.15%；较好的无机盐有KH2PO4、MgSO47H2O、KH2PO4、ZnCl2，浓度范围为0.05%0.1%，加入VB1和2、4-D及橄榄油可促进菌丝生长；最适培养温度为22-28，最适pH为5.0-7.0，转速为120-150r/min，接种量为5%10%。 3、最好的固体培养基：较好的碳源包括小麦、大米、小米、高粱米混合物；合适的氮源包括蛋白胨[16]、大豆粉； VB1、2、4-D、K+、Mg2+、Ca2+及植物激素能促进子实体的生长，可作为生长因子； 300-700lx散射光；菌丝培养：温度15-18，湿度65%-70%；子实体培养温度17-25，不超过25，空气湿度80%90%，最适pH范围57。 4、减少传代次数，防止基因突变菌种培养次数越多转移，变化越大。蛹虫草菌种传代、短期保存、菌种繁殖和制种一般不超过3代。如果需要对蛹虫草菌种进行长期保存，可以采用超低温恒温（0-4）、干燥、缺氧等方法，使菌种细胞代谢明显降低等。尽可能缩短传代次数，保证菌株质量。 5、及时净化，必要时对菌种进行复壮。如已有退化菌株，应及时分离纯化，必要时对菌株进行复壮。由于外部形态和生理生化特性，退化菌株与正常菌株存在明显差异。因此，正常菌株可根据外观及时分离。