日引1号杏鲍菇液体制种条件研究

杏鲍菇（Pleurotus eryngii），又名杏鲍菇。杏鲍菇子实体单生或丛生，果肉厚，开伞慢，柄组织细而结实，洁白而结实，孢子少，保鲜期长，质地脆嫩，风味独特，有特殊的杏仁香气和鲍鱼味，素有“平菇”、“干贝菇”、“草原上的牛肝菌”之称，因其养殖条件苛刻，适宜工业化种植。日银1号是漳州市农业科学研究所于2001年2月从日本引进的杏鲍菇子实体中，经组织分离获得的杏鲍菇新品种。花大，产量好，品质优良，抗病力强。 2010年2月25日通过福建省农作物品种审定委员会审定。杏鲍菇是一种适合工厂化栽培的珍稀食用菌品种，但目前栽培生产多采用固体菌种，不利于规模化、机械化杏鲍菇生产效率高，而液体菌种生产周期短，液体菌种栽培的杏鲍菇结果期比固体菌种短，产量高于固体菌种[3]，所以液体菌种在杏鲍菇栽培中有较好的应用效果。有利于杏鲍菇栽培生产的工厂化、现代化。关于日银1号杏鲍菇液体种子生产条件的探索，目前尚无报道。该研究可为杏鲍菇1号液体菌种的推广应用及杏鲍菇的工业化生产奠定良好的基础，具有重要的研究价值和经济意义。 1 材料与方法1.1 供试材料1.1.1 供试品系平菇品系（日银1号，由福建农业大学友情提供，内江师范大学特色农业资源研究与利用重点实验室栽培后制种）。 1.1.2培养基改良PDA培养基：马铃薯（去皮）200g，葡萄糖20g，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾1g，水1000mL，琼脂15g。 试验所用液体培养基参照郭团鱼、袁建平略有改进。 A。马铃薯20%、麦芽糖2%、蛋白胨2%、酵母膏2%、硫酸镁0.05%、磷酸二氢钾0.1%、VB1 5mg b小米粉2%、蔗糖2%、豆饼粉2%、酵母膏2%、硫酸镁0.05%、磷酸二氢钾0.1%、VB1 5mgc。大豆粉2%、葡萄糖2%、豆饼粉2%、酵母膏2%、硫酸镁0.05%、磷酸二氢钾0.1%、VB1 5mg1.2 试验方法1.2.1 菌种制备按1.1.2 的配方培养基，配制基于250mL锥形瓶的改良PDA培养物，每瓶120mL，用棉塞和报纸盖住锥形瓶，放入高压灭菌器中115灭菌20分钟，备用。在超净工作台上，制成平板后，从倾斜试管中接种，活化培养2周，用孔法（D=8mm）转移到新平板上，27培养在培养箱中培养14 天以备后用。 1.2.2 试验培养基的选择菌株静置培养14天左右，待其覆盖液面后，将试验液体培养基煮沸备用。具体做法是：土豆、小米粉、豆饼粉、黄豆粉、豆饼粉先用天平分别称重，先煮成汁，用5层纱布过滤除去沉淀，剩下的称量的药物应称量。将它们一一加入汁中煮沸约5分钟，转移至250mL锥形瓶中，每个锥形瓶中倒入100mL培养基备用。最后打孔得到培养板，转移到锥形瓶中，27，140r/min培养。为每个测试介质设置五个重复。比较菌丝体的数量和直径以确定最佳培养基。 1.2.3不同菌龄对杏鲍菇菌丝球生长的影响静态培养14天（覆盖平板2/3）、21天（覆盖平板、开始爬壁）、40天将菌株分别接种于装有小米粉液体培养基的锥形瓶中，27，140r/min培养。设置了5 个重复样品。 1.2.4 不同转速对杏鲍菇菌丝球的影响将在小米粉培养基中培养的菌丝球接种到装有90mL小米粉培养基的250mL锥形瓶中，然后置于摇床中。温度为27，转速分别为120r/min、140r/min、160r/min。每个转速设置五个重复样品。

1.3 测定内容和方法1.3.1 菌丝球生物量的测定将培养在锥形瓶中的菌丝球用5层纱布过滤，收集菌丝球，用蒸馏水反复漂洗，然后将收集到的菌丝球用空气清洗-60干燥至恒重，然后用分析天平称量。最后取平均值。 1.3.2 菌丝球直径的测量菌丝球培养完成后，随机选取15个菌丝球，在培养皿中排成一排，培养皿底部铺上坐标纸，然后将所有测量样品中菌丝球的直径。重复3次，取平均值。 2 结果与讨论2.1 试验培养基的选择结果表1和表2表明，最佳液体培养基为2%小米粉、2%豆饼粉、2%蔗糖、2%酵母膏、0.05%硫酸镁、二氢钾磷酸盐0.1%，VB1 5mg。表1日银1号菌丝球在不同试验液体培养基中的生物量(g/100mL) 培养基样品1样品2样品3样品4样品5平均值马铃薯培养基0.403 0.411 0.507 0.513 0.487 0.464 (0.023) a 小米面粉培养基1.312 1.458 1.825 1.408 1.162 1.433 (0.110) c 豆粉培养基0.810 1.093 0.911 0.979 0.897 0.938 (0.047)b 表2 不同试验液体培养基直径日银1号菌丝体(mm) 培养基样品2样品1样品3样品4样品5平均值0.06a2.2 不同菌龄接种菌块对日银1号杏鲍菇菌丝体生长的影响见表3和图1，图2结果表明，达到相同的生长生物量，菌龄最大的菌种不仅培养菌丝球的时间比年轻菌种长6天，而且得到的菌丝球培养量也比年轻菌种高

的菌丝球直径大得多，同时长菌龄培养得到的菌丝球其颜色加深已经呈现老化现象。所以使用菌龄短的菌种培养液体菌种，因为其菌龄短，生物活性强，能快速培养出直径小的菌丝球，培养周期短。　　表3 不同菌龄的菌种日引1号菌丝球达标生物量和培养天数　菌种　菌丝球的平均生物量/(g·100mL-1) 培养天数/d40d菌龄　1.456±0.070　　　　　　　　　　1021d菌龄　1.356±0.067　　　　　　　　　　914d菌龄　1.433±0.110　　　　　　　　　　4　　2.3 不同转速对日引1号菌丝球的影响 不同转速对菌丝球的影响结果如图3和图4所示。转速为120r/min时的菌丝球生物量最低，直径最大，而140r/min时菌丝球生物量最高，菌丝球直径与转速为160r/min时的菌丝球直径相差不大，只是比160r/min时的菌丝球大0.03mm。随着转速的升高，培养基里面的溶氧量增加有利于菌丝球的生长，但转速超过一定范围时，由于液体转动时的剪切力过大，其对菌丝球的机械刺激不利于菌丝球的生成。　　3 结论　　液体培养基的碳氮源组合的不同对杏鲍菇菌丝球的生物量、菌丝球直径的影响较大。从对菌丝球的直径这一重要指标来看，马铃薯液体培养基培养的菌丝球的直径却比小米粉培养基和黄豆粉培养基的大得多，菌丝球的生物量反而最小。黄豆粉液体培养基的菌丝球直径和小米粉液体培养基的相差很小，但菌丝球的生物量也比小米粉液体培养基培养所得的菌丝球生物量小。因此对日引1号杏鲍菇最佳液体培养基为：小米粉2%，蔗糖2%，豆饼粉2%，酵母膏2%，硫酸镁0.05%，磷酸二氢钾0.1%，VB1 5mg的培养基。

图1 40d菌龄菌种培养出的菌丝球

图2 14d菌龄菌种培养出的菌丝球

图3 不同转速对菌丝球生物量的影响

图4 不同转速对菌丝球直径的影响

　　菌龄对日引1号液体培养菌丝球的影响很大，菌龄短的接种菌块的接种优于菌龄长的种块，较小的接种菌块菌丝生长势强旺，菌丝体较之菌龄长的接种菌块疏松，比菌龄长的接种菌块更易受到液体转动时所产生的剪切力的机械切割，所以用其所培养出的菌丝球直径明显比较老化的接种菌块小。培养出液体菌种的时间也比较老化的菌种短得多。试验表明，在培养杏鲍菇液体菌种时，以使用14d菌龄的菌种为宜。　　综合考虑对日引1号杏鲍菇菌丝球的生物量和直径影响，振荡培养最适转速为140r/min。