液体菌种摇瓶振荡培养技术

培养液配制好后，放入500mL锥形瓶中，每瓶容量100mL，加工0-15个小玻璃珠，加棉塞后用牛皮纸包好密封，低温灭菌。 1.5kg/cm2压力30分钟，取出冷却至30以下，插入约2平方厘米斜面，23-25静置培养48小时，然后放置在振荡培养的往复摇床上，振荡频率80-100次/分钟，振幅6cm10cm。如果使用旋转振动器，振荡频率为200-220 rpm。摇床室温控制在2425，培养时间因菌种不同而异，一般7天左右。培养结束的标准是：培养液清澈透明，液体中悬浮着大量的小菌丝球，并伴有各种菌类特有的香味。 1、液体菌种的检验方法液体菌种的检验可采用感官检验和抽样检验相结合的方法。 1、感官检验可采用“看、转、闻”的步骤进行检验。看：把样品放在桌子上观察。看菌液颜色和透明度，正常发酵醪液呈黄色或黄褐色，清澈透明，菌丝颜色因菌种不同而不同，老化后颜色变深；被细菌污染的糊状物浑浊不透明。二是看菌丝的形状和大小。正常菌丝大小一致，呈球形、片状、絮状或棒状。第三，看上清液与沉淀物的比例。菌丝体比例越大越好。瓶中较好的液体菌种比例可达80%左右。四、检查pH指示剂是否变色。在培养基中加入甲基红或复合指示剂，35天后颜色发生变化，表明培养基的pH值达到4.0左右，即为发酵点；如果在24小时内变色，说明培养液的酸度因杂菌快速生长而发生剧烈变化。五、检查是否有酵母线。如果培养基与空气交界处的瓶壁上有灰色条带附着，说明是酵母菌污染所致。这称为酵母系。旋转：轻轻旋转样品瓶，观察菌丝体的特性。醪液粘度高说明菌种性能好；细的说明菌球少，不宜使用。菌丝悬浮力好，放置5分钟不沉降，说明该菌种生长能力强；反之，若菌丝容易沉淀，说明菌丝已经老化或死亡。再观察菌丝状态，大小不一，毛刺明显，说明供氧不足；如果菌丝细小光滑，或菌丝细而自溶，则说明被杂菌污染。闻：样品旋转后，打开瓶盖，闻气味。培养的优质液体菌种均具有芳香气味；而被污染细菌的培养液则散发出酸、甜、霉、臭等各种异味。 2、抽样试验可取液体菌种进行称重检验和粘度检验；生长测定和结果试验；化学检验，包括测量pH值、含糖量和含氧量等；显微检查，包括细胞分裂状态观察、一般染色和特殊染色等。 2、液体菌种的使用方法液体菌种可作为原种使用，也可用于培养。 1.作为原种，取100ml瓶装。兽用注射器取下针尖，换上内径1mm2mm、长度100mm120mm的不锈钢管，制成菌种接种器。使用前，将接种器清洗干净并用纱布包好，高压蒸汽灭菌，冷却后抽出菌液进行接种。将灭菌后的原种瓶插入菌种，应先在无菌条件下除去棉塞，瓶口用无菌薄膜包好。接种时，将针管插入瓶口的薄膜中。每瓶接种量为10mL~15ml。注意使液态菌均匀分布在培养基表面。在房间的床架上栽培。 2、液体菌种作栽培种或直接栽培时，瓶栽每瓶接种量为10mL~15mL；熟料袋栽每袋接种量小袋为10mL15mL，大袋为20mL20mL。 30毫升；露床种植，每平方米接种量为500mL-1000mL，无需接种注射器，可直接均匀喷洒在培养料表面，也可穴播。 （本网站仅供参考）