花片的组织培养与快速繁殖技术

一、花叶石简介

1. 1 植物学名称TraChelospermurnjasmlnoides F1ame。司太立石（Stellite），又名石龙藤，为夹竹桃科常绿藤本植物。它有气生根，经常攀爬在树木、岩石和墙壁上。初夏五月开白花，形似“万”字，有香味。花叶蜡石，叶上有白色或乳黄色斑点，有红色晕。茎有不明显的皮孔，小枝，叶底面和幼叶柄被短柔毛，老枝和叶无毛。叶革质，椭圆形至卵形，圆形或宽内倒，长2-6厘米，宽1-3厘米。老叶近绿色或浅绿色，第一轮新叶红色，每枝多为一对，少数有2-3对粉红色叶子，第二至第三对为纯白色叶子，纯白色叶子之间老绿叶有数对花叶，叶脉大部分呈白色，叶面布有不规则的白斑，从幼叶到老叶白色成分逐渐减少。

1.2 栽培范围石子天然分布于我国东南部，黄河以南地区也有分布。经浙江金华、萧山地区地面种植及盆栽试验初步分析，在其原种范围内可作为彩叶地被植物和风景植物进行野外栽培。作为室内盆栽观赏植物，任何区域都可以使用，尤其是光照条件较好的区域。

1. 3 观赏价值及园林应用叶蜡石的观赏价值在于它的三级叶色，由红、粉、纯白、白、绿叶组成的色组，很像一束盛开的花朵，极其绚丽。 丰富多彩的。由于它是新叶的颜色而不是花朵的颜色，所以它的观赏期是一年四季，尤其是春、夏、秋三季。相对而言，冬季观赏效果较差，因为没有新叶。为了获得最佳的颜色效果，需要进行密集修剪以促进芽萌发，形成紧凑的丛，并促进新叶生长。在花园中，它是一种极为美丽的地被植物，可作为多年生“开花”植物用于各种花道布置；同时也是一种优良的盆栽材料，可替代目前公园及现代化设施中设置的盆花，克服了成本高、观赏期短、需频繁更换盆花的缺点。此外，它也是一种优良的植物，可以作为家庭盆栽

1. 4. 繁殖叶蜡石引种成活率为65%。根据繁殖试验发现，叶蜡石一年中任何季节都可以采用插条繁殖，春、秋季生根率可达80%以上。太嫩的枝条容易腐烂，但达到半木质化的枝条却能生根成活。但通过无性繁殖的方式进行多代繁殖后，容易出现叶色退化，苗木颜色不稳定；采用繁殖镶嵌司太立技术的组织培养方法，在组织培养过程中可出现镶嵌叶，遗传性状稳定。

2 材料类别当年新芽。

3 培养条件基本培养基为HS。 (1)休眠芽诱导萌发培养基MS+NAA0.05mg/L-1(单位下同)+6-BA2.0； (2)芽增殖培养基：MS+IAA0.2+6-BA1.5； (3)：长苗培养基：MS+NAA0.5+6-BA0.5； (4)生根培养基：1/2MS+NAA0.5+IBA0.2。上述培养基均补充20g/L-1蔗糖，7g Er-1琼脂，pH6.0-6.2；光照强度为2000-2500lx，每天14小时；培养温度白天25-30，夜间15-20。

4 生长和分化

4.1 无菌材料的获取选择生长健康的一年生苗木；母株无病虫害，剪去当年萌发的春梢先端，除去叶子，保留叶柄，将枝条剪成2-3厘米的小段。消毒时，先用10%洗衣粉溶液浸泡15分钟，然后用流水冲洗30分钟。无菌条件下，用75%乙醇溶液浸泡30秒，用0.1%氯化汞溶液加Tween-20灭菌3、5、10、15分钟。 0.1%氯化汞溶液的灭菌效果随着灭菌时间的延长而增强。灭菌时间小于10分钟时疫苗无菌率低于13.5%，灭菌15分钟后疫苗无菌率达23.7%。机体死亡率达到33.3%。随着灭菌时间的延长，氯化汞对植物材料的毒害作用加剧。以0.1%氯化汞溶液消毒时间10-15min为宜。使用无菌水； 5次后，接种于MS固体培养基上。

4.2 芽诱导接种20天后将无菌苗转移至培养基（1）中，5-7天芽尖开始萌发，10天腋芽萌发，芽逐渐长大，继续培养20天，全部茎节上的腋芽萌发成侧枝。侧枝生长正常，叶片深绿色，茎基部愈伤组织黄绿色较少。

4. 3 试管苗的增殖将试管苗的侧枝分成2-3个芽，接种在培养基（2）上。 10天后，茎部叶芽萌发，30天后，长出大量侧枝，并产生大量双分枝、三分枝。接种茎段形成簇生苗，有5-8个侧枝，平均繁殖5.8倍。试管苗节间明显拉长，幼叶茎均呈淡红色。叶子大，茎粗，组织不坚固，茎基部的愈伤组织大。此后每30天传代一次，传代3-4次后，试管苗出现玻璃化。

4.4 壮苗培育将增殖培养的试管苗经3-4次继代后转移至培养基（3）中。 40天后形成大量侧枝，平均每个茎段有4-6个侧枝，平均长度1.8厘米，平均倍增3.1倍。基本上没有双或三分支。侧枝生长旺盛； D、组织充实，叶色深绿色，基部愈伤组织小，黄绿色，无玻璃化。

4.5 生根将生长旺盛、长度大于1.2 cm的侧枝分出，转移至培养基（4）上。将光照强度提高到2500-3000lx，并将光照时间延长到每天16小时。培养15天后，根原基开始形成，根原基形成后即可炼苗。 20-25天调查生根情况，生根率为73%，平均每苗生根1-2个。

4.6炼苗移栽将生根的试管苗用瓶子移栽至栽培温室中，培养1周。当根长到0.5-1omb英寸时，打开瓶盖炼苗3-5天，取出已生根的幼苗，洗净生根介质，种植在育苗盘中。以黑色泥炭为基质，温度控制在20-25之间，湿度85%-95%左右。 20天内即可成活，成活率达73%以上。