三叶草的组织培养与快速繁殖研究

关键词三叶草，组织培养，快繁三叶草又名角黑莓、石鼠，为葡萄科、崖豆科属植物。主要分布于长江以南地区，但三叶草多年来遭到破坏性采挖，种源稀少。作者利用组织培养进行快速繁殖研究，以解决资源短缺的问题。 1 材料1.1药材：供试材料采自安徽省，外植体为茎尖、带腋芽的茎段和叶。 1.2 培养基：基础培养基为M S，根据不同的处理方案添加不同类型的植物激素，用0.1N NaOH和0.1N HCL调节pH值至5.8~6.0，高温（121）灭菌。高压灭菌器20分钟。上述培养基均添加3%蔗糖和1%琼脂，培养室温度25左右，每天光照13小时，光照强度约2000 1x。移栽基质按照m（珍珠岩）：m（泥炭）：m（菜园土）=1：1：1的比例进行灭菌和混合。 2 试验方法及结果2.1 样品处理：取茎尖、茎段（带芽）和叶片作为外植体，按以下程序消毒：取材自来水粗洗5%洗涤剂漂洗粉末水溶液5min自来水冲洗30min75%乙醇擦洗表面0.1%汞溶液消毒5min2%次氯酸钠溶液消毒20min无菌水清洗4~6次，然后将外植体在无菌工作台上切成0.5~1.0cm的长段。 2.2 芽诱导培养：将不同部位的外植体接种到表1各培养基中，观察发芽情况，计算发芽率。不同种植体对愈伤组织诱导的影响不同，试验结果是在3号培养基激素浓度配比下进行测试（见表2）。 2.3 继代增殖：将诱导后的愈伤组织和芽簇转移至含有三种不同激素组合的新培养基中进行继代培养。将初代培养的芽簇分离并切成2cm茎段，接种于MS+NAA 0.2培养基中； MS+6BA 0.02+NAA 0.5； MS+6BA 2+NAA 0.2。接种后全天光照，室温20-28。 1周后，腋芽萌发，芽苗迅速生长。 2.4生根培养：不同的激素组合对生根状况影响较大（表4）。将诱导成活的簇芽剪成单芽，转移至表3各培养基中（每瓶一芽）。 30天后，4号培养基生根率可达74%。 2.5移栽定植：当芽长到34cm时，剪下健壮植株，移入生根培养基中。所有植物都能正常生长。培养1周后，生根，每株可长出35根，根长45厘米。再培育一周，植株健壮，叶片深绿，即可揭去纸盖练苗。轻轻洗去根部介质，移至装有蛭石的小盆中，盖上塑料膜和烧杯，保持高温，10天后除去塑料膜和烧杯，移栽到田间。苗木成活率为95%。 3 小结从三叶草不同部位诱导外植体，在相同的消毒处理和相同的培养基中，诱导效果最好的外植体是茎尖。在原代培养过程中，以3号培养基为最佳，4号培养基为最佳生根培养基。 6BA在三叶草继代培养中的作用可以忽略不计，可以认为MS+NAA 0.2是最佳的继代培养基组合。注：本文涉及的图表、注释、公式等内容请阅读PDF格式原文。

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